HTRF CD47/SIRP A BIND. KIT - 10K PTS CD47/SIRP alpha蛋白结合检测试剂盒 - 10,000测试

产品概述

信号调节蛋白α（SIRP-α），又称CD172a，是一种主要表达于髓系细胞（如巨噬细胞）表面的蛋白。其受体CD47广泛表达于所有细胞表面，并已被发现在某些癌症中过表达。CD47与SIRP-α的结合向巨噬细胞传递“不要吃我”信号。在肿瘤情况下，这种信号传导有助于肿瘤逃避免疫系统的攻击。因此，该相互作用的抑制剂在癌症免疫治疗领域具有广阔前景。

相较于其他技术，HTRF（均相时间分辨荧光）检测方案具有诸多优势：

• 均相“加样-读取”模式

• 无需洗涤步骤

• 背景信号低

• 可直接从96或384孔微板小型化至384孔低容量及1536孔等高密度检测规格

• 信号稳定，为读取时间或检测规模提供灵活的操作窗口

工作原理

检测原理
CD47/SIRP结合检测试剂盒包含带标签的人源重组免疫检查点配对蛋白（CD47和SIRP-α）以及用于HTRF检测的标记抗标签试剂。在无抑制剂的情况下，CD47与SIRP-α结合，各检测试剂与其对应标签蛋白的结合产生HTRF信号。在待测化合物、标准品或阻断CD47/SIRP-α相互作用的抗体存在时，HTRF信号随之降低。

检测方案
本试剂盒可在96孔或384孔低容量白色微孔板（终体积20 µL）中运行。操作流程如下：将样品或标准品直接分装至检测板中，随后加入带标签的CD47和SIRP-α蛋白，接着分装HTRF检测试剂。HTRF荧光基团标记的试剂可预先混合并在单个分装步骤中添加。整个过程无需洗涤步骤。该方案还可通过按比例调整各添加体积，实现进一步的小型化或放大化。

检测验证

阻断标准品的抑制效应
使用试剂盒中提供的阻断标准品进行8点剂量响应曲线测定。结果表明CD47-SIRP-α相互作用受到抑制，IC₅₀为2.6 nM。

阻断抗体的抑制效应
分别测试了三种已知可抑制CD47-SIRP-α相互作用的抗体的抑制效应。两种抗CD47抗体（B6H12和B6H12.2）均显示出对相互作用的抑制，IC₅₀值分别为2.2 nM和1.6 nM。抗SIRP-α抗体（SE5A5）同样破坏了该相互作用，IC₅₀为2.4 nM。

技术规格