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HTRF MTOR P-S2448 KIT - 500 PTS 磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶点（mTOR）检测试剂盒 - 500测试

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概述

磷酸化 - mTOR（Ser2448）细胞检测试剂盒是直接在细胞中测量磷酸化 mTOR 的理想选择。该试剂盒采用简化流程，适用于小体积检测形式，可从基础研究应用到高通量药物筛选。

工作原理

磷酸化 - mTOR（Ser2448）检测原理
磷酸化 - mTOR（Ser2448）检测用于测量在 Ser2448 位点发生磷酸化的 mTOR。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 - mTOR（Ser2448）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 - mTOR（Ser2448）双板检测方案
双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，之后加入磷酸化 - mTOR（Ser2448）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

磷酸化 - mTOR（Ser2448）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 - mTOR（Ser2448）可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案可实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测方案

检测验证
磷酸化 - mTOR 细胞检测中 HTRF 检测与蛋白质印迹法（WB）的比较
将人胚肾 293（Hek293）细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。去除细胞培养基后，加入 3mL 补充的裂解缓冲液，孵育 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。取等量裂解物，对蛋白质印迹法和 HTRF 检测进行平行比较。HTRF 检测显示出与蛋白质印迹法相同的灵敏度：两种技术均为 1560 个细胞。

胰岛素对 NIH 3T3 细胞的剂量反应
小鼠 NIH 3T3 细胞（100,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的福司柯林刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板检测方案测量磷酸化 mTOR。

雷帕霉素对 Jurkat 细胞基础水平的抑制作用
Jurkat 细胞（100,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的抑制剂孵育 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用单板检测方案测量磷酸化 mTOR 基础水平的抑制情况。

简化通路
磷酸化 - mTOR（Ser2448）检测试剂盒的简化通路
雷帕霉素的哺乳动物靶点（mTOR）是一种丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶，可作为 ATP 和氨基酸传感器，在细胞生长和稳态中发挥关键作用。由于 mTOR 在肿瘤中可能存在异常调控，目前它正作为潜在的抗癌治疗靶点被研究。mTOR 自身可通过 PI3 激酶 / Akt 信号通路在 Ser2448 位点发生磷酸化，并在 Ser2481 位点发生自磷酸化。

规格

其他规格
应用领域
细胞信号传导
品牌
HTRF
检测方式
HTRF
裂解缓冲液兼容性
裂解缓冲液 1
裂解缓冲液 3
裂解缓冲液 4
裂解缓冲液 5
分子修饰
磷酸化
产品类别
试剂盒
样品体积
16 µL
运输条件
干冰运输
靶标类别
磷酸化蛋白
靶标物种
人
小鼠
技术
时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域
心血管疾病
代谢 / 糖尿病
非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化
神经科学
肿瘤学与炎症
单位规格
500 次检测点数

没有数据

货号：64TORPEG

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