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HTRF TAU P-S202/T205 KIT - 500 PTS 磷酸化Tau(S202/T205) 检测试剂盒-500 测试

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概述

HTRF 磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）细胞检测试剂盒是定量内源性在丝氨酸 202 / 苏氨酸 205 位点磷酸化的磷酸化 - TAU 的理想选择。

在阿尔茨海默病（AD）和帕金森病（PD）中，TAU 存在不同状态。TAU 过度磷酸化也是多种神经退行性疾病和中枢神经系统疾病的标志物。

工作原理

磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）检测原理

磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）检测用于测量在 Ser202/Thr205 位点磷酸化的 TAU。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。

磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，之后加入磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）HTRF 检测试剂。

该方案能够监测细胞活力和汇合度。

磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。

这种为高通量筛选（HTS）设计的方案可实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

GSK3β 抑制剂可抑制 TAU 在 S202/T205 位点的磷酸化

将 50,000 个人类 SH-SY5Y 细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 72 小时。

用不同浓度的 GSK3 抑制剂（CHIR99021 和 BIO）孵育 3 小时后，移除培养基，加入 50μl 裂解缓冲液，在室温下轻轻摇晃孵育 30 分钟以裂解细胞。将 16μL 裂解物转移到 384 孔白色微量板中，并加入 4μL HTRF 磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）检测试剂。

overnight 孵育后记录 HTRF 信号。

碱性磷酸酶处理可消除 TAU 在 Ser202/Thr205 位点的磷酸化

将 50,000 个人类 SH-SY5Y 细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 72 小时。移除培养基，加入 50μl 裂解缓冲液，在室温下轻轻摇晃孵育 30 分钟以裂解细胞。

加入碱性磷酸酶（25U）和适当的缓冲液，1 小时后移除。将 16μL 裂解物转移到 384 孔白色微量板中，并加入 4μL HTRF 磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）检测试剂。overnight 孵育后记录 HTRF 信号。

BIO 抑制剂可抑制 TAU 磷酸化，而 α- 微管蛋白保持稳定

将 50,000 个人类 SH-SY5Y 细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 72 小时。然后用 GSK3 抑制剂 BIO 处理 SH-SY5Y 细胞 3 小时。移除细胞培养基后，加入 50μl 裂解缓冲液，在室温下轻轻摇晃孵育 30 分钟以裂解细胞。将 16μL 裂解物转移到 384 孔白色微量板中，并加入 4μL HTRF 磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）和 α- 微管蛋白检测试剂。

overnight 孵育后记录 HTRF 信号。

HTRF 与蛋白质印迹法（Western blot）的比较

将人类 SH-SY5Y 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养至 80% 汇合度。弃去细胞培养基，加入 3mL 补充的裂解缓冲液，在室温下孵育 30 分钟以裂解细胞。离心 10 分钟后收集可溶性组分。用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，然后取 16μL 每种稀释液，分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 进行平行分析。

使用 HTRF 磷酸化 - TAU（Ser202/Thr205）细胞检测试剂盒，仅需 2,500 个细胞即可检测到最小信号，而蛋白质印迹法则需要 5,000 个细胞。HTRF 细胞检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 2 倍。

简化通路

阿尔茨海默病通路与 TAU 的作用

TAU 在阿尔茨海默病的发病机制中起着重要作用。它会发生过度磷酸化并聚集形成细丝，这些细丝还可进一步浓缩成神经原纤维缠结。TAU 聚集体可能通过类似朊病毒的方式在细胞间传播，从而加剧病理过程。调节 TAU 过度磷酸化并减少 TAU 聚集的药物是可行的治疗方法。

TAU 蛋白的生理作用是促进微管的组装和稳定。目前已发现 TAU 有 6 种异构体，其氨基酸残基数从 352 到 441 不等，这些异构体来自外显子 2、3 和 10 的选择性剪接。TAU 最长的异构体（TAU-441）含有 85 个潜在的磷酸化位点，其中一半已通过实验得到证实。

规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容裂解缓冲液：裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4、裂解缓冲液 5
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：神经科学
单位规格：500 次检测点数

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货号：64TS2PEG

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