64TS422PEG

概述

HTRF 磷酸化 TAU（Ser422）细胞检测试剂盒是定量内源性丝氨酸 422 位点磷酸化 TAU 的理想工具。在阿尔茨海默病（AD）和帕金森病（PD）中，TAU 存在不同状态。

TAU 过度磷酸化也是多种神经退行性疾病和中枢神经系统疾病的标志物。

工作原理

磷酸化 TAU（Ser422）检测原理
磷酸化 TAU（Ser422）检测用于测定在 Ser422 位点发生磷酸化的 TAU。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。

磷酸化 TAU（Ser422）检测采用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖于蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的格式即可评估蛋白质的磷酸化状态。

检测方案
磷酸化 TAU（Ser422）双板检测方案
双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再加入磷酸化 TAU（Ser422）HTRF 检测试剂。

该方案可监测细胞活力和汇合度。

磷酸化 tau s422 双板检测方案
磷酸化 TAU（Ser422）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 TAU（Ser422）可在单个平板中完成，该平板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。

这种为高通量筛选（HTS）设计的方案可实现微型化，同时保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

磷酸化 tau s422 单板检测方案

检测验证
在人 SH-SY5Y 细胞系中，BIO 诱导 GSK3 抑制后对 Tau S422 磷酸化的评估
将人 SH-SY5Y 细胞以 100,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时后，用浓度递增的 GSK3α/β 抑制剂 BIO（6 - 溴靛玉红 - 3 - 肟）处理细胞 1 小时，随后用 100nM 冈田酸处理 2 小时，再用 100nM 花萼海绵诱癌素 A 处理 10 分钟。之后移除培养基，加入 50µL 补充的 1X 裂解缓冲液。在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，并加入 4µL HTRF 磷酸化 Tau（Ser422）或总 Tau 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

BIO 诱导的 GSK3α/β 抑制可完全抑制 TAU 在丝氨酸 422 位点的磷酸化，而在相同实验条件下，TAU 的表达水平保持稳定。

磷酸化 tau（Ser422）检测验证
在小鼠 Neuro2a 细胞系中，BIO 诱导 GSK3 抑制后对 Tau S422 磷酸化的评估
将小鼠 Neuro2a 细胞以 100,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时后，用浓度递增的 GSK3α/β 抑制剂 BIO（6 - 溴靛玉红 - 3 - 肟）处理细胞 1 小时，随后用 100nM 冈田酸处理 2 小时，再用 100nM 花萼海绵诱癌素 A 处理 10 分钟。之后移除培养基，加入 50µL 补充的 1X 裂解缓冲液。在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，并加入 4µL HTRF 磷酸化 Tau（Ser422）或总 Tau 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

与 SH-SY5Y 细胞中的结果一致，BIO 诱导的 GSK3α/β 抑制可抑制 TAU 在丝氨酸 422 位点的磷酸化，而总 Tau 试剂盒仅对人源样本具有特异性。

磷酸化 tau（Ser422）检测验证
HTRF 磷酸化 Tau（Ser422）检测与蛋白质印迹法的比较
将人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞接种于含完全培养基的 T175 培养瓶中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 2 天。然后，用 100nM 冈田酸处理细胞 2 小时，再用 100nM 花萼海绵诱癌素 A 处理 10 分钟。处理后，用 3mL 补充的 1 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。

将细胞裂解物用补充的裂解缓冲液进行系列稀释，取 16µL 各稀释液转移至 384 孔低体积白色微孔板中，然后加入 4µL HTRF 磷酸化 Tau（Ser422）检测试剂。使用等量的裂解物进行蛋白质印迹法与 HTRF 检测的平行比较。

结果表明，至少在这些实验条件下，HTRF 磷酸化 Tau（Ser422）检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 4 倍。

磷酸化 tau（Ser422）检测验证

简化通路
TAU 蛋白在阿尔茨海默病通路中的作用
TAU 在阿尔茨海默病的发病机制中起着重要作用。它会发生过度磷酸化并聚集形成纤维，进而可浓缩成神经原纤维缠结。TAU 聚集物可能通过类似朊病毒的方式在细胞间传播，从而加剧病理进程。调节 TAU 过度磷酸化并减少 TAU 聚集的药物是可行的治疗手段。

TAU 蛋白的生理作用是促进微管的组装和稳定。目前已发现 6 种 TAU 亚型，由外显子 2、3 和 10 选择性剪接产生，氨基酸残基数为 352-441。最长的 TAU 亚型（TAU-441）含有 85 个潜在磷酸化位点，其中一半已通过实验证实。

磷酸化通路 tau 磷酸化 s422 试剂盒

规格

其他规格

应用
细胞信号传导
品牌
HTRF
检测方式
HTRF
裂解缓冲液兼容性
1 号裂解缓冲液
3 号裂解缓冲液
4 号裂解缓冲液
5 号裂解缓冲液
分子修饰
磷酸化
产品类别
试剂盒
样品体积
16µL
运输条件
干冰运输
靶标类别
磷蛋白
靶标物种
人、小鼠
技术
时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域
神经科学
单位规格
10,000 次检测点

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HTRF TAU P-S422 KIT - 10K PTS