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HTRF TAU P-T181 KIT - 10K PTS

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概述

HTRF 磷酸化 TAU（Thr181）细胞检测试剂盒是定量内源性苏氨酸 181 位点磷酸化 TAU 的理想工具。在阿尔茨海默病（AD）和帕金森病（PD）中，TAU 存在不同状态。

TAU 过度磷酸化也是多种神经退行性疾病和中枢神经系统疾病的标志物。

工作原理

磷酸化 TAU（Thr181）检测原理
磷酸化 TAU（Thr181）检测用于测定在 Thr181 位点发生磷酸化的 TAU。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。

磷酸化 TAU（Thr181）检测采用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖于蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的格式即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 tau（Thr181）检测原理
磷酸化 TAU（Thr181）双板检测方案
双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再加入磷酸化 TAU（Thr181）HTRF 检测试剂。

该方案可监测细胞活力和汇合度。

tau 双板检测方案
磷酸化 TAU（Thr181）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 TAU（Thr181）可在单个平板中完成，该平板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。

这种为高通量筛选（HTS）设计的方案可实现微型化，同时保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

tau 单板检测方案

检测验证

在人 SH-SY5Y 细胞系中，BIO 诱导 GSK3 抑制后对 Tau T181 磷酸化的评估
将人 SH-SY5Y 细胞以 100,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时后，用浓度递增的 GSK3α/β 抑制剂 BIO（6 - 溴靛玉红 - 3 - 肟）处理细胞 3 小时。之后移除培养基，加入 50µL 补充的 1X 裂解缓冲液。在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，并加入 4µL HTRF 磷酸化 Tau（Thr181）或总 Tau 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

BIO 诱导的 GSK3α/β 抑制对 TAU 在苏氨酸 181 位点的磷酸化仅有微弱抑制作用，而在相同实验条件下，TAU 的表达水平保持稳定。这一结果与已知的参与 Tau T181 位点磷酸化的多种激酶（如 GSK3、p38MAPK、ERK 或 JNK）的作用一致。

磷酸化 tau 检测验证
在小鼠 Neuro2a 细胞系中，BIO 诱导 GSK3 抑制后对 Tau T181 磷酸化的评估
将小鼠 Neuro2a 细胞以 100,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时后，用浓度递增的 GSK3α/β 抑制剂 BIO 处理细胞 3 小时。之后移除培养基，加入 50µL 补充的 1X 裂解缓冲液。在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，并加入 4µL HTRF 磷酸化 Tau（Thr181）或总 Tau 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

在小鼠 Neuro2a 细胞中，BIO 诱导的 GSK3α/β 抑制对 TAU 在苏氨酸 181 位点的磷酸化仅有微弱抑制作用。注意，总 Tau 检测试剂盒仅对人源样本特异，与小鼠模型无交叉反应。

磷酸化 tau 检测验证
在病理性人及小鼠脑提取物中检测磷酸化 T181 和总 Tau
淀粉样蛋白 β 处理小鼠（由 Amylgen 友情提供，官网链接待定）和人阿尔茨海默病患者的脑样本按照技术说明《在组织样本上优化您的 htrf® 细胞信号检测》（应用说明链接）制备。

使用 BCA 法对每个脑提取物的蛋白质含量进行定量，并在系列稀释前将其调整至 1mg/mL 的蛋白质浓度。然后将 16µL 各稀释液转移至低体积白色微孔板中，再加入 4µL HTRF 磷酸化 Tau（Thr181）或总 Tau 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

图表显示，HTRF 磷酸化 Tau（Thr181）检测能够在人及小鼠脑组织样本中检测到苏氨酸 181 磷酸化的 Tau，而 HTRF 总 Tau 试剂盒仅对人源样本特异。

磷酸化 tau 检测验证
磷酸化 tau 检测验证
HTRF 磷酸化 Tau（Thr181）检测与蛋白质印迹法的比较
将人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞接种于 T175 培养瓶的完全培养基中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 2 天。然后，用 3mL 补充的 1 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。

将细胞裂解物用补充的裂解缓冲液进行系列稀释，取 16µL 各稀释液转移至 384 孔低体积白色微孔板中，然后加入 4µL HTRF 磷酸化 Tau（Thr181）检测试剂。使用等量的裂解物进行蛋白质印迹法与 HTRF 检测的平行比较。

结果表明，至少在这些实验条件下，磷酸化 Tau（Thr181）检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 4 倍。

磷酸化 tau（Thr181）检测验证

简化通路
TAU 蛋白在阿尔茨海默病通路中的作用
TAU 在阿尔茨海默病的发病机制中起着重要作用。它会发生过度磷酸化并聚集形成纤维，进而可浓缩成神经原纤维缠结。TAU 聚集物可能通过类似朊病毒的方式在细胞间传播，从而加剧病理进程。调节 TAU 过度磷酸化并减少 TAU 聚集的药物是可行的治疗手段。

TAU 蛋白的生理作用是促进微管的组装和稳定。目前已发现 6 种 TAU 亚型，由外显子 2、3 和 10 选择性剪接产生，氨基酸残基数为 352-441。最长的 TAU 亚型（TAU-441）含有 85 个潜在磷酸化位点，其中一半已通过实验证实。

磷酸化通路 tau 磷酸化（Thr181）

规格

其他规格
应用
细胞信号传导
品牌
HTRF
检测方式
HTRF
裂解缓冲液兼容性
1 号裂解缓冲液
3 号裂解缓冲液
4 号裂解缓冲液
5 号裂解缓冲液
分子修饰
磷酸化
产品类别
试剂盒
样品体积
16µL
运输条件
干冰运输
靶标类别
磷蛋白
靶标物种
人、小鼠
技术
时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域
神经科学
单位规格

10,000 次检测点

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货号：64TT181PEH

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