HTRF HUMAN XIAP BIR3 BIND KIT - 500 PTS 凋亡抑制蛋白重复序列3结合检测试剂盒

产品概述

一种快速简便的方法，用于识别和表征靶向XIAP蛋白BIR3结构域的新型结合物。

X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）属于凋亡抑制蛋白（IAP）家族成员，该家族还包括cIAP1。XIAP是IAP家族中最有效的caspase抑制成员，也是多种凋亡刺激和死亡通路的负调控因子。

XIAP在肿瘤细胞中的过表达已被证实是多种癌症化疗耐药的介质之一，且与肿瘤侵袭性相关，使其成为癌症治疗中备受关注的靶点。目前已有多种治疗策略被探索，如SMAC模拟物。

此外，XIAP具有E3连接酶活性，可导致靶蛋白的泛素化及其后续降解。这一特性可通过蛋白降解靶向嵌合体（PROTAC）策略加以利用。因此，靶向XIAP的新型化合物若兼具双重功能——即抑制XIAP的抗凋亡功能和诱导靶蛋白降解——将代表一种有前景的治疗策略。

与其他IAP家族蛋白一样，XIAP含有BIR结构域，该结构域与caspase等配体蛋白中的IAP结合基序相互作用。已有研究表明，这种相互作用调控着促凋亡和抗凋亡活性。

在BIR2和BIR3结构域上对XIAP化合物进行表征，可实现精确的活性分析和选择性研究。

工作原理

检测原理
HTRF XIAP BIR3结合检测试剂盒采用竞争性检测模式，使用XIAP BIR3 Red配体（基于A410099.1衍生物）、带有GST标签的人源XIAP BIR3结合结构域，以及抗GST铽穴状化合物标记的抗体。XIAP结合化合物会与Red配体竞争，从而阻止FRET（荧光共振能量转移）的发生。

检测方案
本试剂盒可在96孔或384孔低容量白色微孔板（终体积20 µL）中运行。操作流程如下：将样品或标准品直接分装至检测板中，随后加入人源GST标签XIAP BIR3结合结构域，接着分装HTRF检测试剂（即铽穴状化合物标记的抗GST抗体，以及d2标记的配体）。HTRF荧光基团标记的试剂可预先混合并在单个分装步骤中添加。整个过程无需洗涤步骤。该方案还可通过按比例调整各添加体积，实现进一步的小型化或放大化。

检测验证

XIAP正构配体和PROTAC配体的筛选
XIAP抗肿瘤药物策略分为SMAC模拟物（XIAP正构化合物）和PROTAC/SNIPER化合物两类。已知这些化合物对BIR2结构域的结合亲和力低于对BIR3结构域或XIAP全长蛋白的亲和力。

图1：对多种已知药理学化合物进行了表征。正构化合物包括LCL161（用作检测标准品）、GDC-0152、A410099.1和高亲和力XIAP配体SM164。这些化合物的Ki值在nM级别，其中SM164的Ki值更低，表明该检测体系能够准确测定化合物对XIAP BIR3结构域的效价及药理学排序，与预期一致。SNIPER-BRD4化合物（包含LCL161 XIAP配体和(+)-JQ-1 BRD4配体）的效价在nM级别。与预期一致，不相关化合物沙利度胺（Thalidomide，Cereblon E3连接酶正构配体）不能与XIAP荧光配体竞争结合，证明了该试剂盒对XIAP结合物的特异性。

XIAP BIR3结构域与BIR2结构域的化合物谱图分析
对多种XIAP配体进行了表征。正构化合物LCL161、GDC-0152、A410099.1和SM164均表现出预期的选择性谱图，即对BIR3结构域的亲和力高于BIR2结构域。

DMSO对检测性能的影响
测试了不同百分比的DMSO（孔内终浓度从0.4%至2%）。结果表明，检测窗口和IC₅₀均未随DMSO百分比增加而发生显著变化（至少可耐受至2%终浓度）。

DMSO对HTRF人源XIAP BIR3结合检测试剂盒的影响

技术规格