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概述


该细胞裂解物为总 MEK1 检测分析提供了一种验证方法。作为阳性对照,它能帮助研究人员在进行检测时避免出现任何检测问题。此裂解物来源于经刺激处理的 HEK 293 细胞。


规格说明


其他规格


  • 应用领域:细胞信号传导
  • 品牌:HTRF
  • 检测方式:HTRF
  • 分子修饰类型:总蛋白
  • 产品类别:对照裂解物
  • 运输条件:干冰运输
  • 靶标类别:磷蛋白
  • 靶标物种:人
  • 技术原理:时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)
  • 治疗领域:肿瘤学与炎症
  • 单位规格:1 瓶


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结果显示,PDGF 刺激可诱导 NIH-3T3 细胞中 SHP2 Tyr542 发生强烈磷酸化,而在相同实验条件下,SHP2 的表达水平保持稳定。


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HTRF 检测与蛋白质印迹法(Western Blot)的比较

将人 Jurkat 细胞系接种到 T175 培养瓶中,在 37°C、5% CO₂条件下孵育。用 30 µM 过钒酸盐处理细胞 30 分钟后进行裂解。用补充裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释,取 16 µL 各稀释液转移至低体积白色微孔板,然后加入 4 µL HTRF 磷酸化 SHP2 检测试剂。使用等量的裂解物进行 HTRF 与蛋白质印迹法的平行比较。结果显示,使用 HTRF 总 SHP2 检测时,每孔仅需 1,250 个细胞即可检测到信号;而使用基于化学发光(ECL)检测的蛋白质印迹法时,则需要 20,000 个细胞。这些结果表明,HTRF 总 SHP2 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 16 倍。


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简化通路

SHP2 的功能与调控

SHP1(也称为非受体型酪氨酸蛋白磷酸酶 6,PTPN6)是一种主要在造血细胞中表达的酪氨酸磷酸酶,由 Lck 激活并通过细胞表面受体招募。SHP2(也称为非受体型酪氨酸蛋白磷酸酶 11)在造血细胞和非造血细胞中均广泛表达。尽管 SHP2 负调控 T 细胞活化,但它在响应血小板衍生生长因子(PDGF)或成纤维细胞生长因子(FGF)等生长因子时,对 ERK 通路的活化具有正向调控作用。


在 T 淋巴细胞中,SHP1 和 SHP2 被免疫检查点抑制剂招募,从而参与 T 细胞受体(TCR)信号通路的抑制。SHP1 和 SHP2 与 PD1 的免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)相互作用,并被 Lck 激酶磷酸化激活。活化的 SHP1 和 SHP2 磷酸酶会导致 TCR 信号通路中关键效应因子(如 ZAP70 或 SLP76)的去磷酸化,而这些因子是 T 细胞增殖和发挥功能所必需的。


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货号:64NH2PEG
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