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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Biomarkers > HTRF PAB ANTI MOUSE-D2 - 5K PTS D2标记的鼠免疫球蛋白测试蛋白- 5,000测试

产品概述

该产品的活性成分源自兔抗小鼠免疫血清,其中的免疫球蛋白 G(IgG)经免疫纯化工艺处理后,标记 d2 荧光基团,形成高特异性的多克隆抗体抗小鼠 IgG-d2(PAb Anti Mouse IgG-d2)。需特别说明的是,产品概述中提及的 “PAb Anti Human IgG-XL665” 为表述误差,实际产品可精准检测未标记的小鼠特异性抗体与靶分子,或免疫球蛋白融合蛋白之间的结合反应,为小鼠源分子相互作用研究提供高特异性工具。HTRF 技术支持该试剂在生化与细胞两种实验体系中应用,能够广泛覆盖多种类型的相互作用研究,包括蛋白 / 蛋白、蛋白 / 多肽、蛋白 / DNA、蛋白 / RNA、蛋白 / 碳水化合物、蛋白 / 小分子及受体 / 配体相互作用。依托技术核心优势,其可检测的亲和力常数范围覆盖皮摩尔(picomolar)至低毫摩尔(low millimolar)级别,灵活适配不同强度的分子相互作用分析场景,满足基础生物学研究、药物研发等多样化需求。

工作原理

检测原理

在 HTRF 相互作用检测体系中,参与相互作用的两种分子需分别通过直接或间接方式标记供体荧光团与受体荧光团,检测产生的信号强度与两者的结合程度呈正相关。本试剂的典型应用示例:多克隆抗体抗小鼠 IgG-d2 与带小鼠 Fc 融合标签的分子 A 特异性结合,而分子 B * 则与标记 HTRF 供体的特异性抗体结合。若分子 B 经过生物素化、带标签、Fc 融合等修饰,可选用对应的 HTRF 供体标记试剂(如抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素等)完成检测,确保实验灵活性与适用性。(标注:HTRF PAb Anti Mouse IgG-d2 1.svg 为图表标识,对应 “抗小鼠 IgG-d2 HTRF 检测原理”)

检测流程

以下为终反应体积 20 µL 的标准检测流程,适用于检测带小鼠 Fc 融合标签的分子 A 与非标记分子 B * 的相互作用,具体步骤如下:

  1. 向检测板中加入两种待检测相互作用分子(共计 10 µL),按照实验需求进行孵育;
  2. 加入 5 µL 多克隆抗体抗小鼠 IgG-d2 及 5 µL 供体标记的抗分子 B 抗体,孵育完成后,通过 HTRF 兼容检测仪读取信号即可完成检测。

若分子 B 经过生物素化、带标签、Fc 融合修饰或直接标记,需替换为对应的 HTRF 供体标记试剂(如抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素等)进行检测,适配不同实验设计需求。(标注:HTRF PAb Anti Mouse IgG-d2 2.svg 为图表标识,对应 “抗小鼠 IgG-d2 HTRF 检测流程”)

检测详情

定制专属 HTRF 相互作用检测方案

  • 试剂按检测次数(20 µL 反应体系 / 次)销售,XL665 或 d2 标记抗体的标准用量为每孔 20 ng 抗体,产品说明书中会明确标注每瓶试剂的活性成分含量及标记物数量(活性成分为偶联物的功能活性部分,如抗体的抗原结合结构域)。

检测次数与活性成分的关联逻辑

每孔偶联物的平均用量反映总生物材料负载量,实际应用中优先参考活性成分含量(而非总偶联物质量)更具科学性。对于铕穴状化合物(Cryptate)和 d2 标记偶联物,由于标记物分子量极小可忽略不计,总偶联物量与活性成分量基本一致;而 XL665 标记偶联物的总偶联物量会因 XL665 与抗体的最终摩尔偶联比不同而变化,但 Revvity 提供的活性成分量恒定,且严格匹配订购的检测次数,确保实验重复性与结果可靠性。(标注:HTRF PAb Anti Mouse IgG-d2 3.svg 为图表标识,对应 “检测次数与活性成分关联说明”)

推荐的铕穴状化合物与 XL665 偶联物用量标准

  • 铕穴状化合物偶联物(供体):用量需严格控制,过量使用易导致检测仪信号饱和及背景信号过高,影响检测准确性。多数实验场景下 1–5 nM 的浓度最为适宜,根据所使用的 HTRF 兼容检测仪型号不同,在 620 nm 波长下可产生 20,000–80,000 cps(计数 / 秒)的稳定信号。
  • XL665 偶联物(受体):浓度需尽可能与检测靶点浓度匹配,以确保最大比例的生物分子被 XL665 受体标记。例如,若检测靶点的反应体系浓度为 20 nM,抗标签 - XL665 偶联物的浓度应达到等摩尔或更高水平,以保证结合效率,提升检测信号的特异性与灵敏度。

产品规格

  • 应用领域:蛋白 - 蛋白相互作用检测(Protein-Protein Interaction)
  • 品牌:HTRF
  • 检测方式:HTRF(均相时间分辨荧光)
  • 产品类别:荧光试剂(Fluorescent Reagent)
  • 运输条件:干冰运输(Shipped in Dry Ice)
  • 靶标类别:生物制品(Biologics)
  • 靶标物种:小鼠(Mouse)
  • 技术平台:TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
  • 适用治疗领域:心血管疾病(Cardiovascular)、感染性疾病(Infectious Diseases)、炎症(Inflammation)、代谢 / 糖尿病(Metabolism/Diabetes)、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化(NASH/Fibrosis)、神经科学(Neuroscience)、肿瘤学与炎症(Oncology & Inflammation)、罕见病(Rare Diseases)
  • 单位规格:5,000 次检测(5,000 assay points)


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