概述

HTRF 人基质金属蛋白酶 9（MMP9）检测试剂盒旨在测定人源细胞培养上清液中 MMP9（前体形式与活性形式）的浓度。基质金属蛋白酶 9（MMP9），又称明胶酶 B，是一种锌依赖性内肽酶，以无活性的前体酶形式分泌，随后通过蛋白水解切割被激活。MMP9 通过降解细胞外基质（ECM）的结构成分（如胶原蛋白、明胶和弹性蛋白），在组织修复与重塑中发挥重要作用。此外，该内肽酶还可通过加工多种非细胞外基质分子（如细胞因子和趋化因子，例如前体转化生长因子 -β、前体肿瘤坏死因子 -α、趋化因子 CXCL1、CXCL8、干扰素 -β），在细胞生长、迁移、炎症反应和血管生成过程中扮演关键角色。其酶活性受生理抑制剂 —— 金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP1 和 TIMP2）的调控，这些抑制剂可阻止底物与酶的催化结构域结合。MMP9 的表达主要在转录水平受多种生长因子、细胞因子及细菌产物（包括脂多糖，LPS）调控。MMP9 表达上调会导致 MMP9 与 TIMP1/2 失衡，这与组织纤维化、癌症、糖尿病、关节炎及心血管疾病相关。因此，在研究此类疾病及研发新药物时，该生物标志物的分泌水平常作为重要检测终点。

工作原理

检测原理

Cisbio 公司的人 MMP9 检测试剂盒基于时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）夹心免疫检测法，涉及两种特异性抗人 MMP9 抗体：一种标记有铕（Eu³⁺）穴状化合物（供体），另一种标记有 d2（受体）。两种抗体均能与人 MMP9 结合，供体与受体的近距离接触会产生荧光 TR-FRET 信号。信号强度与人 MMP9 在样本中的浓度呈正比。（图示：human-mmp9-kit，人 MMP9 试剂盒相关图示）

检测方案

Cisbio 公司的人 MMP9 检测可在 96 孔或 384 孔低体积白色检测板中进行（最终反应体积为 20 微升）。具体操作如下：将细胞样本或标准品直接加样至检测板中，随后使用 HTRF® 试剂检测人 MMP9。标记有 HTRF 荧光团的抗体可预先混合，通过单次加样步骤加入，无需洗涤步骤。只需按比例调整各试剂的添加体积，即可进一步缩小或扩大检测规模（如调整孔板规格）。该检测可用于冷冻保存或新鲜制备的细胞样本，且大多数 TR-FRET 多功能酶标仪均可记录 HTRF 信号。（图示：human-mmp9-kit，人 MMP9 试剂盒相关图示）

检测验证

脂多糖（LPS）和佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）诱导人肝星状细胞系 LX-2 中 MMP9 的表达上调

将人肝星状细胞系 LX-2 * 接种于 96 孔板中（每孔 50,000 个细胞），使用完全培养基培养。次日，用 100 微升不同剂量的 LPS 或 PMA（稀释于添加 0.2% 牛血清白蛋白（BSA）的无胎牛血清（FBS）培养基中）处理细胞 24 小时。收集细胞上清液，对分泌的 MMP9 水平进行定量检测。结果与文献数据一致：LPS 处理可使人体 MMP9 分泌量呈剂量依赖性增加；PMA 处理细胞 24 小时可诱导人 MMP9 分泌水平上调。* 该细胞系由 EMD Millipore 公司提供（产品编号：#SCC064）（图示：human-mmp9-kit，人 MMP9 试剂盒相关图示）（图示：human-mmp9-kit，人 MMP9 试剂盒相关图示）

佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）和活性氧（ROS）诱导人乳腺癌细胞系 MCF-7 中 MMP9 的表达上调

将人乳腺癌细胞系 MCF-7 接种于 96 孔板中，使用完全培养基培养。次日，用 50 微升不同剂量的 PMA 或过氧化氢（H₂O₂）（稀释于添加 0.5% BSA 的无 FBS 培养基中）处理细胞 24 小时。收集细胞上清液，对分泌的 MMP9 水平进行定量检测。结果符合预期：细胞暴露于 PMA 或 H₂O₂中 24 小时，可使人体 MMP9 分泌量呈剂量依赖性增加。（图示：human-mmp9-kit，人 MMP9 试剂盒相关图示）（图示：human-mmp9-kit，人 MMP9 试剂盒相关图示）

HTRF 人 MMP9 检测试剂盒与商用酶联免疫吸附试验（ELISA）的相关性

对经 PMA 处理 24 小时（在添加 0.2% BSA 的无 FBS 培养基中）的 LX-2 * 细胞上清液，采用 HTRF 人 MMP9 检测试剂盒与商用 ELISA 试剂盒进行平行对比检测。结果显示，两种方法的相关性极佳，相关系数（r）接近 1。* 该细胞系由 EMD Millipore 公司提供（产品编号：#SCC064）（图示：human-mmp9-kit，人 MMP9 试剂盒相关图示）

规格参数

其他规格

• 应用领域（Application）：蛋白质定量（Protein Quantification）
• 品牌（Brand）：HTRF
• 检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光技术）
• 产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
• 样本体积（Sample Volume）：16 微升（16 µL）
• 运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：生物标志物（Biomarkers）
• 靶标物种（Target Species）：人（Human）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术）
• 治疗领域（Therapeutic Area）：心血管疾病（Cardiovascular）、代谢 / 糖尿病（Metabolism/Diabetes）、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化（NASH/Fibrosis）、肿瘤学与炎症（Oncology & Inflammation）
• 单位规格（Unit Size）：10,000 个检测点（10,000 assay points）