概述

颗粒体蛋白前体（Progranulin，又称上皮蛋白前体或前列腺癌细胞（PC）衍生生长因子）是颗粒体蛋白（granulin）的前体蛋白。颗粒体蛋白前体与额颞叶变性（FTLD）及阿尔茨海默病相关，在这些疾病中，它可能具有抵抗 β 淀粉样蛋白毒性的作用。这款基于细胞的均相时间分辨荧光（HTRF）检测试剂盒可快速得出结果，适用于利用分泌颗粒体蛋白前体的细胞进行化合物功能筛选。

工作原理

检测原理

人颗粒体蛋白前体的检测采用夹心免疫检测法，该方法涉及两种特异性抗人颗粒体蛋白前体抗体：一种标记有铽穴状化合物（供体），另一种标记有 d2（受体）。检测信号强度与样本中颗粒体蛋白前体的浓度呈正比。（图示：human-progranulin-kit-1.svg，人颗粒体蛋白前体试剂盒相关图示 1）

检测方案

颗粒体蛋白前体检测方案操作简便，使用 384 孔低体积白色检测板（最终反应体积为 20 微升），具体步骤如下：将细胞上清液、样本或标准品直接加样至检测板中，用于检测人颗粒体蛋白前体。标记有 HTRF 供体和受体的抗体可预先混合，通过单次加样步骤加入，进一步简化检测流程。只需按比例调整各试剂的添加体积，该检测即可在 96 孔至 384 孔板中进行。（图示：human-progranulin-kit-2.svg，人颗粒体蛋白前体试剂盒相关图示 2）

检测详情

批内与批间检测

批内检测（n=24，即每个样本重复检测 24 次）

• 样本 1：颗粒体蛋白前体平均浓度为 781 皮克 / 毫升（pg/mL），变异系数（CV）为 2.1%
• 样本 2：颗粒体蛋白前体平均浓度为 3125 皮克 / 毫升（pg/mL），变异系数（CV）为 2.1%
• 样本 3：颗粒体蛋白前体平均浓度为 6250 皮克 / 毫升（pg/mL），变异系数（CV）为 1.4%
• 样本 4：颗粒体蛋白前体平均浓度为 25000 皮克 / 毫升（pg/mL），变异系数（CV）为 1.2%
• 样本 5：颗粒体蛋白前体平均浓度为 50000 皮克 / 毫升（pg/mL），变异系数（CV）为 1.2%
• 平均变异系数（Mean CV）：1.6%

批间检测（n=4，即每个样本在 4 个不同实验中检测）

• 样本 1：颗粒体蛋白前体平均浓度为 777 皮克 / 毫升（pg/mL），变异系数（CV）为 11%
• 样本 2：颗粒体蛋白前体平均浓度为 1787 皮克 / 毫升（pg/mL），变异系数（CV）为 12%
• 样本 3：颗粒体蛋白前体平均浓度为 4109 皮克 / 毫升（pg/mL），变异系数（CV）为 13%
• 样本 4：颗粒体蛋白前体平均浓度为 21739 皮克 / 毫升（pg/mL），变异系数（CV）为 10%
• 样本 5：颗粒体蛋白前体平均浓度为 50000 皮克 / 毫升（pg/mL），变异系数（CV）为 8%
• 平均变异系数（Mean CV）：11%

稀释线性

• 稀释倍数 1：颗粒体蛋白前体预期浓度（无数据），检测浓度为 42602 皮克 / 毫升（pg/mL），回收率（无数据）
• 稀释倍数 2：颗粒体蛋白前体预期浓度为 21301 皮克 / 毫升（pg/mL），检测浓度为 21100 皮克 / 毫升（pg/mL），回收率 99%
• 稀释倍数 4：颗粒体蛋白前体预期浓度为 10650 皮克 / 毫升（pg/mL），检测浓度为 10524 皮克 / 毫升（pg/mL），回收率 99%
• 稀释倍数 8：颗粒体蛋白前体预期浓度为 5325 皮克 / 毫升（pg/mL），检测浓度为 5023 皮克 / 毫升（pg/mL），回收率 94%
• 稀释倍数 16：颗粒体蛋白前体预期浓度为 2663 皮克 / 毫升（pg/mL），检测浓度为 2711 皮克 / 毫升（pg/mL），回收率 102%
• 稀释倍数 32：颗粒体蛋白前体预期浓度为 1331 皮克 / 毫升（pg/mL），检测浓度为 1398 皮克 / 毫升（pg/mL），回收率 105%
• 稀释倍数 64：颗粒体蛋白前体预期浓度为 666 皮克 / 毫升（pg/mL），检测浓度为 707 皮克 / 毫升（pg/mL），回收率 106%
• 平均回收率：101%上述实验获得的优异回收率表明，该检测方法具有良好的线性关系。

加标回收率

• 样本 1（基础浓度 1419 皮克 / 毫升）
  • 加标浓度 492 皮克 / 毫升：预期浓度 1911 皮克 / 毫升，检测浓度 1788 皮克 / 毫升，回收率 97%
  • 加标浓度 2199 皮克 / 毫升：预期浓度 3618 皮克 / 毫升，检测浓度 3339 皮克 / 毫升，回收率 92%
  • 加标浓度 11139 皮克 / 毫升：预期浓度 12558 皮克 / 毫升，检测浓度 12187 皮克 / 毫升，回收率 97%
• 样本 2（基础浓度 4440 皮克 / 毫升）
  • 加标浓度 492 皮克 / 毫升：预期浓度 4932 皮克 / 毫升，检测浓度 4850 皮克 / 毫升，回收率 98%
  • 加标浓度 2199 皮克 / 毫升：预期浓度 6639 皮克 / 毫升，检测浓度 6285 皮克 / 毫升，回收率 95%
  • 加标浓度 11139 皮克 / 毫升：预期浓度 15579 皮克 / 毫升，检测浓度 16201 皮克 / 毫升，回收率 104%
• 样本 3（基础浓度 19493 皮克 / 毫升）
  • 加标浓度 492 皮克 / 毫升：预期浓度 19985 皮克 / 毫升，检测浓度 19703 皮克 / 毫升，回收率 99%
  • 加标浓度 2199 皮克 / 毫升：预期浓度 21692 皮克 / 毫升，检测浓度 21490 皮克 / 毫升，回收率 99%
  • 加标浓度 11139 皮克 / 毫升：预期浓度 30632 皮克 / 毫升，检测浓度 32267 皮克 / 毫升，回收率 105%

向 3 种不同血清样本中添加等量重组蛋白，将标准曲线得出的响应值与计算得出的预期值进行比较。约 100% 的回收率验证了该检测所用样本基质的适用性。

检测验证

诱导多能干细胞（iPSC）来源小胶质细胞分泌颗粒体蛋白前体

诱导多能干细胞来源小胶质细胞（iPSC-Microglia）的制备参照 McQuade 等人 2018 年的研究方法。在无转化生长因子 -β1（TGF-β1）的条件下，用 10 纳克 / 毫升的细胞因子刺激诱导多能干细胞来源小胶质细胞 24 小时。收集细胞上清液，按照 HTRF 试剂盒说明书中的步骤检测分泌型颗粒体蛋白前体的水平。结果与文献一致：经 γ- 干扰素（IFN-γ）+ 白细胞介素 - 1β（IL-1β，促炎因子）处理的小胶质细胞，其颗粒体蛋白前体释放量呈下降趋势；而经抗炎性 Th2 细胞因子（白细胞介素 - 4（IL-4）和白细胞介素 - 13（IL-13））处理的小胶质细胞，其分泌型颗粒体蛋白前体水平显著升高。数据由 Amanda McQuade 与 Mathew Blurton-Jones 博士（加州大学欧文分校）友情提供（图示：human-progranulin-kit，人颗粒体蛋白前体试剂盒相关图示）

规格参数

其他规格

• 应用领域（Application）：蛋白质定量（Protein Quantification）
• 品牌（Brand）：HTRF
• 检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光技术）
• 产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
• 样本体积（Sample Volume）：16 微升（16 µL）
• 运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：生物标志物（Biomarkers）
• 靶标物种（Target Species）：人（Human）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术）
• 单位规格（Unit Size）：10000 个检测点（10,000 assay points）