概述

黑色素瘤分化相关基因 5（MDA-5，Melanoma Differentiation-Associated Gene 5）是一种视黄酸诱导基因 I 样受体（RIG-I-like receptor），作为细胞质中的双链 RNA（double stranded RNA）传感器发挥作用，在感知病毒感染以及激活抗病毒反应级联（包括诱导 I 型干扰素和促炎细胞因子）中扮演关键角色。已知 MDA-5 在执行核酸感知功能时，会沿 RNA 链形成聚集体（aggregates）。此外，MDA-5 可能在增强自然杀伤细胞功能方面发挥重要作用，还可能参与多种肿瘤细胞系的生长抑制与凋亡过程。

工作原理

MDA-5 聚集体检测原理

MDA-5 聚集体的检测采用双抗夹心免疫分析法，该方法使用一种对 MDA-5 聚集体具有特异性的抗 MDA-5 单克隆抗体，抗体分别标记有铽 - 穴状化合物（terbium-Cryptate）或 d2，以确保检测质量、重复性与信号质量。检测产生的特异性均相时间分辨荧光（HTRF）信号强度与 MDA-5 聚集体的含量呈正比。（图示：1biomarkers-how-it-works-assay-principle-mda5-aggregation-63adk111peg-63adk111peh.svg，MDA-5 聚集体检测原理相关图示）

MDA-5 聚集体检测方案

将细胞样本转移至检测板中，用于 MDA-5 聚集体的检测。标记有 HTRF 荧光团的抗体可预先混合，并通过单次加样步骤加入，以进一步简化检测流程。只需按比例调整各试剂的加样体积，该检测即可在 96 孔板至 384 孔板中进行。（图示：2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-mda5-aggregation-63adk111peg-63adk111peh.svg，MDA-5 聚集体检测方案相关图示）

检测验证

聚肌苷酸 - 聚胞苷酸（Poly I:C）刺激 HUTU80 细胞后 MDA-5 聚集体的检测

将 HUTU80 细胞接种到含完全培养基的 96 孔板中，在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下孵育。次日，用含聚肌苷酸 - 聚胞苷酸（Poly I:C，高分子量 / HMW）/ 脂质载体（LyoVec）的低血清培养基（含 0.5% 胎牛血清 / FBS）处理细胞，在 37°C、5% 二氧化碳环境中孵育 2 小时。处理后，加入补充型 3 号裂解缓冲液（supplemented lysis buffer #3），在室温（RT）下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞；取 16 微升（µL）裂解液，分两次转移至低体积白色微孔板中，随后加入 4 微升预混合的 HTRF MDA-5 聚集体或总 MDA-5 检测试剂。孵育过夜（ON）后，记录 HTRF 信号。（图示：3assay-validation-mda5-aggregation-1.svg，MDA-5 聚集体检测验证相关图示）

规格参数

其他规格

• 应用领域（Application）：蛋白质定量（Protein Quantification）
• 品牌（Brand）：HTRF
• 检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光技术）
• 产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
• 样本体积（Sample Volume）：16 微升（16 µL）
• 运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：生物标志物（Biomarkers）
• 靶标物种（Target Species）：人（Human）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术，Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer）
• 治疗领域（Therapeutic Area）：感染性疾病（Infectious Diseases）、炎症（Inflammation）
• 单位规格（Unit Size）：500 个检测点（500 assay points）