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SARS-CoV-2 核衣壳蛋白(N 蛋白)是冠状病毒寡聚核衣壳的基础单体成分。该蛋白是主要免疫原,在病毒感染早期阶段即大量表达,且从感染患者发病第一天起就能在其血清中检测到。因此,SARS-CoV-2 N 蛋白是病毒感染的可靠标志物,同时也是疫苗研发中潜在的免疫原候选物。
细胞裂解液中的 SARS-CoV-2 颗粒通过双抗夹心免疫分析法检测,该方法使用抗核衣壳单克隆抗体,抗体分别标记有铽 - 穴状化合物(terbium-Cryptate)或 d2,可确保检测质量、重复性与信号质量。检测产生的特异性均相时间分辨荧光(HTRF)信号强度与核衣壳蛋白的含量呈正比。(图示:1biomarkers-how-it-works-assay-principle-sars-cov-2-capsid-kit-63adk113peg-63adk113peh.svg,SARS-CoV-2 核衣壳蛋白检测原理相关图示)
右侧介绍了检测方案,该方案使用 384 孔小体积板或 96 孔低体积板(最终反应体积为 20 微升)。取 16 微升细胞裂解液或对照样本直接加至检测板中,使用 HTRF 试剂进行检测。标记有 HTRF 供体和受体的抗体可预先混合,通过单次加样步骤加入 4 微升;也可分开加样,每次加入 2 微升,两种方式均可进一步简化检测流程。(注:原文中检测方案图示编号为 “2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-spike-s1-protein-kit-63adk114peg-63adk114peh.svg”,标注为刺突 S1 蛋白试剂盒检测方案,推测为文本错植,此处保留图示编号并明确对应 SARS-CoV-2 核衣壳蛋白检测方案)(图示:2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-spike-s1-protein-kit-63adk114peg-63adk114peh.svg,SARS-CoV-2 核衣壳蛋白检测方案相关图示)
取 16 微升溶解于 5 号裂解缓冲液(lysis buffer #5)中的重组蛋白,加至低体积白色微孔板中,随后加入 4 微升预混合的 HTRF 抗 SARS-CoV-2 核衣壳检测试剂。在室温(RT)下孵育 2 小时后,记录 HTRF 信号。(图示:3assay-validation-sars-cov-2-capsid-kit-1.svg,重组 SARS-CoV-2 核衣壳蛋白检测相关图示)
(图示:4assay-validation-sars-cov-2-capsid-kit-std.svg,SARS-CoV-2 核衣壳蛋白试剂盒标准曲线相关图示)