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严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 型(SARS-CoV-2)刺突蛋白 S1 亚基(Spike S1 蛋白)是该病毒刺突蛋白(S 蛋白)的两个组成部分之一。其中,S1 亚基负责介导病毒与宿主细胞的跨膜血管紧张素转换酶 2 受体(ACE2 受体)结合;而 S2 亚基则具备构象变化能力,在 S1 亚基与 ACE2 受体结合后,可促使病毒颗粒包膜与宿主细胞膜发生融合。因此,S1 蛋白在病毒感染过程中的作用受到广泛研究,它不仅是病毒感染的可靠标志物,也是潜在的疫苗免疫原靶点。
检测细胞裂解液中的 SARS-CoV-2 颗粒时,采用双抗夹心免疫分析法,所用抗体为抗 S1 单克隆抗体,分别标记有铽 - 穴状化合物(terbium-Cryptate)或 d2,可确保检测质量、重复性与信号质量。检测所产生的特异性均相时间分辨荧光(HTRF)信号强度与 S1 蛋白的含量呈正比。(图示:1biomarkers-how-it-works-assay-principle-spike-s1-protein-kit-63adk114peg-63adk114peh.svg,SARS-CoV-2 刺突蛋白 S1 亚基检测原理相关图示)本检测方案使用 384 孔小体积板或 96 孔低体积板(最终反应体积为 20 微升),具体操作说明如下:取 16 微升细胞裂解液或对照样本,直接加至检测板中,使用 HTRF 试剂进行检测。标记有 HTRF 供体和受体的抗体可预先混合,通过单次加样步骤加入 4 微升;也可分开加样,每次加入 2 微升,两种加样方式均可进一步简化检测流程。(图示:2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-spike-s1-protein-kit-63adk114peg-63adk114peh.svg,SARS-CoV-2 刺突蛋白 S1 亚基检测方案相关图示)
取 16 微升溶解于 5 号裂解缓冲液(lysis buffer #5)中的重组 S1 蛋白,加至低体积白色微孔板中,随后加入 4 微升预混合的 HTRF 抗 SARS-CoV-2 核衣壳检测试剂。在室温下孵育过夜(ON)后,记录 HTRF 信号。(图示:3assay-validation-spike-s1-protein-kit-1.svg,重组 SARS-CoV-2 S1 蛋白检测相关图示)
(图示:4assay-validation-spike-s1-protein-kit-std.svg,SARS-CoV-2 刺突蛋白 S1 亚基试剂盒标准曲线相关图示)