HTRF AAV3B CAPSID KIT - 500 PTS

产品概述

腺相关病毒（AAV）载体是治疗多种人类疾病的领先基因递送平台，其中 AAV3B 血清型作为基因治疗载体时，对肝细胞的转导效率优于其他多数血清型，因此被广泛开发用于血友病等疾病的基因治疗研究。此外，AAV3B 对脑、肌肉、视网膜等组织也具有天然靶向性。HTRF AAV3B 衣壳检测试剂盒专为 AAV3B 病毒颗粒的检测与定量设计，采用免洗涤、操作简便的检测格式，相较于传统 ELISA 方法通量显著提升，为 AAV3B 相关基因治疗药物的研发、生物工艺生产质控及过程优化提供高效、精准的解决方案。该试剂盒基于 TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）技术平台，适用于生物工艺场景，可兼容从原始收获物到终产品的各类样品（包括细胞上清液、细胞裂解液），凭借稳定的分析性能与广泛的样品兼容性，助力基因治疗药物研发与生产流程的标准化。

工作原理

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心 TR-FRET 检测技术，核心试剂包含两种特异性抗 AAV3B 抗体：一种是辣根过氧化物酶（HRP）偶联的抗 AAV3B 抗体，可与预混液 1 中的抗 HRP-d2（受体荧光团）结合；另一种是生物素（Biotin）偶联的抗 AAV3B 抗体，可与预混液 2 中的链霉亲和素 - 铕穴状化合物（Streptavidin Eu-cryptate，供体荧光团）结合。当样品中存在 AAV3B 衣壳时，两种抗体将分别与衣壳上的不同抗原表位结合，形成 “供体 - 生物素抗体 - AAV3B 衣壳 - HRP 抗体 - 受体” 的夹心复合物，使供体与受体荧光团近距离接触，激发 FRET 信号。信号强度与样品中 AAV3B 衣壳的浓度呈正相关，通过校准曲线即可实现 AAV3B 病毒颗粒的定量分析，且全程无需洗涤步骤。（标注：1assay-principle-aav3b-64aav3peg-64aav3peh-64aav3pey.svg 对应 “AAV3B 衣壳检测试剂盒 TR-FRET 检测原理示意图”）

检测流程

试剂盒推荐使用 384 孔小体积白色检测板，也可灵活适配至 1536 孔板（按比例调整各试剂体积），具体流程如下：

1. 向检测板中加入 5 µL 样品或标准品，再加入 5 µL 稀释液；
2. 分别加入 5 µL 预混液 1（HRP 抗 AAV3B 抗体 + 抗 HRP-d2）和 5 µL 预混液 2（生物素抗 AAV3B 抗体 + 链霉亲和素 - 铕穴状化合物），最终反应体积为 20 µL；
3. 室温下孵育过夜；
4. 使用 HTRF 兼容检测仪读取信号，完成定量分析。

（标注：2assay-protocol-aav3b-64aav3peg-64aav3peh-64aav3pey.svg 对应 “AAV3B 衣壳检测试剂盒检测流程示意图”）

检测详情

核心检测参数

• 样品体积：5 µL
• 最终反应体积：20 µL
• 检测周期：室温孵育过夜
• 检测下限（LOD，稀释液中）：3.94×10⁸ VP/mL（病毒颗粒 / 毫升）
• 动态范围：2.62×10⁹ – 6.00×10¹¹ VP/mL
• 样品兼容性：兼容从原始收获物到终产品的各类样品，包括细胞上清液、细胞裂解液（适配裂解缓冲液 LB#3）

（标注：3assay-specification-aav3b-64aav3peg-64aav3peh-64aav3pey.svg 对应 “AAV3B 衣壳检测试剂盒核心检测参数表”）

分析性能

精密度（Precision）

1. 批内精密度

对 3 个不同浓度的样品各重复检测 24 次，浓度为 4.00×10¹¹ VP/mL 的样品 CV 为 4%，1.00×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 8%，2.50×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 10%，平均 CV 为 7%，表现出稳定的批内检测一致性。

2. 批间精密度

3 个样品由不同操作者在 3 次独立实验中完成检测，浓度为 4.00×10¹¹ VP/mL 的样品 CV 为 3%，1.00×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 3%，2.50×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 10%，平均 CV 为 6%，证明试剂盒在不同实验人员、不同实验批次下仍能保持可靠的检测性能。

稀释线性（Dilutional Linearity）

对高浓度样品进行梯度稀释验证，原液回收率为 100%，2 倍稀释后回收率为 101%，4 倍稀释后回收率为 99%，8 倍稀释后回收率为 88%，16 倍稀释后回收率为 80%，平均回收率达 97%，线性表现良好，可满足常规浓度梯度样品的稀释检测需求。

干扰因素（Interferences）

1. SF9 细胞裂解液蛋白干扰

SF9 细胞裂解液中的总蛋白浓度会对检测结果产生一定干扰：当总蛋白浓度为 0.188 mg/mL 时，回收率为 56%；浓度降至 0.094 mg/mL 时，回收率提升至 76%；0.047 mg/mL 时回收率为 87%；0.023 mg/mL 时回收率达 96%，蛋白浓度越低，干扰越小，检测结果越精准。

2. HEK293 细胞裂解液蛋白干扰

HEK293 细胞裂解液的蛋白浓度对检测回收率的影响如下：总蛋白浓度为 1.500 mg/mL 时，回收率为 84%；0.750 mg/mL 时回收率为 76%；0.375 mg/mL 时回收率为 95%；0.094 mg/mL 时回收率为 96%；0.047 mg/mL 时回收率达 102%，当总蛋白浓度≤0.047 mg/mL 时，检测结果接近理想水平。

加标回收率（Antigen Spike and Recovery）

1. SF9 细胞裂解液（0.10 mg/mL 总蛋白）

在总蛋白浓度为 0.10 mg/mL 的 SF9 细胞裂解液中加入不同浓度的 AAV3B 标准品，2.00×10¹¹ VP/mL 浓度的回收率为 78%，5.00×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 90%，1.25×10⁹ VP/mL 浓度的回收率为 84%，平均回收率达 84%，满足常规检测的准确性要求。

2. HEK293 细胞裂解液（0.40 mg/mL 总蛋白）

在总蛋白浓度为 0.40 mg/mL 的 HEK293 细胞裂解液中加标检测，2.00×10¹¹ VP/mL 浓度的回收率为 91%，5.00×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 103%，1.25×10⁹ VP/mL 浓度的回收率为 93%，平均回收率为 95%，检测准确性优异。

交叉反应性（Cross Reactivities）

对 AAV 家族其他血清型的交叉反应性进行评估，通过在试剂盒稀释液中稀释不同 AAV 血清型衣壳，按标准流程（5 µL 衣壳样品 + 5 µL 稀释液 + 10 µL 检测试剂，室温孵育过夜后读取信号）检测，结果显示试剂盒对不同血清型的亲和力存在差异，但不检测 AAV8 和 AAV9，特异性优异，可有效避免其他血清型的干扰。（标注：Delta Ratio Cross reactivity AAV3B.png 对应 “AAV3B 衣壳检测试剂盒交叉反应性验证图”）

检测验证

完整与空 AAV3B 颗粒的检测验证

为验证试剂盒对完整与空 AAV3B 衣壳的检测能力，对 AAV3B-CMV-eGFP 完整颗粒（含基因组）和空衣壳（不含基因组）进行检测。先通过独立定量实验将不同浓度的 AAV3B-CMV-eGFP（GC/mL）转换为 VP/mL，再将完整颗粒与空衣壳用试剂盒稀释液稀释后，按标准流程（5 µL 样品 + 5 µL 稀释液 + 10 µL 检测试剂，室温孵育过夜）检测。结果显示，试剂盒对完整 AAV3B 颗粒和空 AAV3B 衣壳的检测效果一致，可全面覆盖两种类型颗粒的定量需求。（标注：4assay-validation-aav3b-64aav3peg-64aav3peh-64aav3pey-full-empty-recognition.svg 对应 “AAV3B 完整与空衣壳检测验证图”）

产品规格

• 应用领域：生物工艺（Bioprocessing，用于 AAV3B 病毒颗粒的检测与定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：试剂盒（Kit）
• 样品体积：5 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：病毒颗粒（Viral Particles）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 单位规格：500 次检测（500 assay points）