产品概述

腺相关病毒（AAV）载体是用于治疗多种人类疾病的主流基因递送平台。AAV6 血清型（AAV6）是向骨骼肌或肺组织递送基因的高效载体。该 AAV6 衣壳试剂盒专为定量检测细胞裂解液和细胞上清液中的腺相关病毒 6 型（AAV6）颗粒而设计。

工作原理

AAV6 衣壳检测原理

腺相关病毒 6 型（AAV6）检测可对细胞上清液或细胞裂解液中的 AAV6 衣壳进行定量。该检测采用两种抗 AAV6 抗体：一种偶联辣根过氧化物酶（HRP），可与预混液 1 中的抗 HRP d2（受体）结合；另一种偶联生物素，可与预混液 2 中的链霉亲和素 - 铕穴状化合物（供体）结合。当细胞提取物或上清液中存在 AAV6 衣壳时，加入上述偶联物会使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样品中衣壳浓度呈正相关，且在免洗涤检测格式下，可用于评估实验变量引起的任何变化。（附图标注：1assay-principle-aav6-64aav6peg-64aav6peh-64aav6pey.svg，对应 “AAV6 衣壳检测原理示意图”）

AAV6 衣壳检测流程

采用 384 孔小体积白色检测板的 AAV6 衣壳检测流程说明如下：将 5 微升样品或标准品与 5 微升稀释液直接加入检测板中，随后使用均相时间分辨荧光（HTRF®）试剂进行检测。生物素化抗 AAV6 抗体需先与标记供体的链霉亲和素预混合，HRP 标记抗 AAV6 抗体需先与标记受体的抗 HRP 预混合，再分别加入 5 微升两种预混液。该检测可灵活适配至 1536 孔板格式，只需按比例调整各试剂的添加体积即可。（附图标注：2assay-protocol-aav6-64aav6peg-64aav6peh-64aav6pey.svg，对应 “AAV6 衣壳检测流程示意图”）

检测详情

AAV6 衣壳检测规格

样品体积为 5 微升，最终检测体积为 20 微升，在室温下孵育过夜即可获取结果。稀释液中的检测限（LOD）为 1.42×10⁸ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL），动态范围为 2.47×10⁹ – 5.00×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）。样品兼容性广泛，适用于从原始收获物到终产品的各类样品，且兼容细胞上清液、细胞裂解液（适配裂解缓冲液 LB#3）。（附图标注：3assay-specification-aav6-64aav6peg-64aav6peh-64aav6pey.svg，对应 “AAV6 衣壳检测规格图”）

分析性能

精密度（Precision）

批内精密度

对 3 个样品分别进行重复检测，样品 1 的 AAV6 平均浓度为 2.00×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL），变异系数（CV）为 10%；样品 2 的 AAV6 平均浓度为 5.00×10¹⁰ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL），变异系数为 7%；样品 3 的 AAV6 平均浓度为 1.25×10¹⁰ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL），变异系数为 3%；3 个样品的平均变异系数为 7%。

批间精密度

3 个样品由不同操作者在 3 次独立实验中完成检测，样品 1 的 AAV5 平均浓度为 2.00×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）（注：原文此处疑似笔误，应为 “AAV6”），变异系数为 7%；样品 2 的 AAV5 平均浓度为 3.20×10¹⁰ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）（注：原文此处疑似笔误，应为 “AAV6”），变异系数为 8%；样品 3 的 AAV5 平均浓度为 1.28×10¹⁰ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）（注：原文此处疑似笔误，应为 “AAV6”），变异系数为 11%；3 个样品的平均变异系数为 9%。所有样品均由不同操作者在 3 次独立实验中完成检测，并计算每个样品的变异系数（% CV）。

稀释线性（Dilutional Linearity）

对高浓度样品进行梯度稀释验证，原液的 AAV6 实测浓度为 3.87×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL），回收率为 100%；2 倍稀释后，预期 AAV6 浓度为 1.93×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL），实测浓度为 2.03×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL），回收率为 105%；4 倍稀释后，预期 AAV6 浓度为 9.67×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）（注：原文此处疑似笔误，应为 “9.67×10¹⁰ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）”），实测浓度为 1.05×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL），回收率为 108%；8 倍稀释后，预期 AAV6 浓度为 4.84×10¹⁰ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL），实测浓度为 5.49×10¹⁰ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL），回收率为 113%；所有稀释梯度的平均回收率为 107%。

干扰因素（Interferences）

当 AAV6 浓度为 1.0×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）时，SF9 细胞裂解液的总蛋白浓度对回收率产生如下影响：总蛋白浓度为 0.5 毫克 / 毫升时，回收率为 61%；总蛋白浓度为 0.375 毫克 / 毫升时，回收率为 61%；总蛋白浓度为 0.25 毫克 / 毫升时，回收率为 65%；总蛋白浓度为 0.125 毫克 / 毫升时，回收率为 64%；总蛋白浓度为 0.05 毫克 / 毫升时，回收率为 100%。当 AAV6 浓度为 1.0×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）时，HEK293 细胞裂解液的总蛋白浓度对回收率产生如下影响：总蛋白浓度为 1.5 毫克 / 毫升时，回收率为 96%；总蛋白浓度为 0.75 毫克 / 毫升时，回收率为 100%；总蛋白浓度为 0.5 毫克 / 毫升时，回收率为 104%；总蛋白浓度为 0.375 毫克 / 毫升时，回收率为 106%；总蛋白浓度为 0.25 毫克 / 毫升时，回收率为 104%。

抗原加标回收率（Antigen Spike and Recovery）

在总蛋白浓度为 0.05 毫克 / 毫升的 SF9 细胞裂解液中加入不同浓度的 AAV6 标准品：加入浓度为 1.00×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）的标准品时，回收率为 91%；加入浓度为 5.00×10¹⁰ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）的标准品时，回收率为 103%；加入浓度为 1.00×10¹⁰ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）的标准品时，回收率为 100%；平均回收率为 98%。在总蛋白浓度为 1.5 毫克 / 毫升的 HEK293 细胞裂解液中加入不同浓度的 AAV6 标准品：加入浓度为 1.00×10¹¹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）的标准品时，回收率为 100%；加入浓度为 5.00×10¹⁰ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）的标准品时，回收率为 93%；加入浓度为 5.00×10⁹ 病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）的标准品时，回收率为 91%；平均回收率为 95%。

交叉反应性（Cross Reactivities）

已对腺相关病毒（AAV）家族其他血清型的交叉反应性进行评估。使用试剂盒稀释液稀释各血清型的 AAV 衣壳，为每种血清型绘制标准曲线。将 5 微升衣壳加入 384 孔小体积白色检测板，依次加入 5 微升稀释液和 10 微升 HTRF AAV6 衣壳检测试剂，在室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。结果显示，该检测对不同血清型的亲和力存在差异，但不与 AAV8 和 AAV9 发生交叉反应。（附图标注：2analytical-performance-aav2-64aav2peg-64aav2peh-64aav2pey-cross-reactivities.svg，对应 “AAV6 衣壳检测交叉反应性示意图”）

检测验证

AAV6 完整颗粒与空颗粒的 HTRF 检测验证

为验证该试剂盒对 AAV6 完整衣壳与空衣壳的检测能力，实验分析了其对 AAV1-CMV-eGFP 完整颗粒（注：原文此处疑似笔误，应为 “AAV6-CMV-eGFP”）和 AAV6 空衣壳的识别效果。通过独立样品定量实验，将不同浓度的 AAV6-CMV-eGFP（单位：GC/mL）转换为病毒颗粒 / 毫升（VP/mL）；随后将稀释后的完整颗粒或空衣壳各取 5 微升加入 384 孔小体积白色检测板，再加入 5 微升稀释液和 10 微升 HTRF AAV6 衣壳检测试剂，在室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。结果显示，该 HTRF AAV6 衣壳检测试剂盒对 AAV6 完整颗粒与空颗粒的检测效果一致。（附图标注：4assay-validation-aav6-64aav6peg-64aav6peh-64aav6pey-full-empty-recognition.svg，对应 “AAV6 完整与空衣壳检测验证图”）

产品规格

其他规格

• 应用领域（Application）：生物工艺（Bioprocessing）
• 品牌（Brand）：HTRF
• 检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 裂解缓冲液兼容性（Lysis Buffer Compatibility）：裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4
• 产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
• 样品体积（Sample Volume）：5 微升
• 运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：病毒颗粒（Viral Particles）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 单位规格（Unit Size）：10,000 次检测（10,000 assay points）