产品概述

脊髓小脑性共济失调 2 型相关蛋白（Ataxin 2）是一种 RNA 结合蛋白。在人类中，当 Ataxin 2 携带极长的多聚谷氨酰胺链时，会引发神经退行性病变，并推动肌萎缩侧索硬化症（ALS）的疾病进展。目前在神经退行性疾病（尤其是 ALS）领域的研究表明，TDP-43 会调控 Ataxin 2 的表达，而 Ataxin 2 反过来会改变 TDP-43 在细胞和动物模型中的毒性。这两种蛋白的联合研究是未来治疗探索的重要方向，近期研究结果显示，降低 Ataxin 2 水平可抑制 TDP-43 的聚集。

工作原理

人 / 小鼠 Ataxin 2 检测原理

人 / 小鼠 Ataxin 2 检测基于时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）双抗夹心免疫分析技术，涉及两种特异性抗体：一种标记有铕离子穴状化合物（Eu³⁺ cryptate，供体），另一种标记有 d2（受体）。两种抗体均可结合 Ataxin 2（野生型及突变型），供体与受体的近距离接触会产生荧光 TR-FRET 信号。信号强度与样本（细胞裂解液或组织裂解液）中 Ataxin 2 的浓度直接成正比。（图示：1assay-principle-ataxin2-64ata2peg-64ata2peh-64ata2pey.svg，Ataxin 2 检测原理相关图示）

人 / 小鼠 Ataxin 2 检测方案

该检测可在 96 孔或 384 孔低体积白色检测板中进行，最终反应体积为 20 微升。操作流程如下：将样本（细胞 / 组织裂解液）或标准品直接加入检测板，再使用均相时间分辨荧光（HTRF）试剂检测 Ataxin 2。标记有 HTRF 荧光团的抗体可预先混合，通过单次加样步骤加入，无需洗涤步骤。通过按比例调整各试剂的添加体积，可进一步实现实验的微型化或规模化扩展。（图示：2assay-protocol-how-it-works-ataxin2-64ata2peg-64ata2peh-64ata2pey.svg，Ataxin 2 检测方案相关图示）

检测详情

技术参数

• 样本量：5 微升（µL）
• 最终检测体积：20 微升（µL）
• 出结果时间：室温下过夜（Overnight at RT）
• 1 号裂解缓冲液中的检测限（LOD）：7 皮克 / 毫升（pg/mL）
• 动态范围：21–10000 皮克 / 毫升（pg/mL）
• 物种兼容性：人（Human）、小鼠（Mouse）

（图示：3assay-validation-ataxin2-64ata2peg-64ata2peh-64ata2pey-specifications.svg，Ataxin 2 检测技术参数相关图示）

分析性能

批内精密度

• 第一组：
  • 样本 1：平均 Ataxin 2 浓度 100 pg/mL，变异系数（CV）10.0%
  • 样本 2：平均 Ataxin 2 浓度 640 pg/mL，变异系数（CV）3.6%
  • 样本 3：平均 Ataxin 2 浓度 1600 pg/mL，变异系数（CV）6.7%
  • 样本 4：平均 Ataxin 2 浓度 4000 pg/mL，变异系数（CV）6.2%
  • 平均变异系数：6.6%
• 第二组：
  • 样本 1：平均 Ataxin 2 浓度 100 pg/mL，变异系数（CV）6.1%
  • 样本 2：平均 Ataxin 2 浓度 640 pg/mL，变异系数（CV）1.7%
  • 样本 3：平均 Ataxin 2 浓度 1600 pg/mL，变异系数（CV）0.5%
  • 样本 4：平均 Ataxin 2 浓度 4000 pg/mL，变异系数（CV）3.8%
  • 平均变异系数：3.0%

注：每个样本在 3 个独立实验（3 个不同日期）中进行检测，并计算每个样本的变异系数（% CV）；样本为转染野生型 Ataxin 2 的 HEK293 细胞裂解液。

稀释回收率

• 原液：预期浓度无，实测 Ataxin 2 浓度 2831 pg/mL，稀释回收率 100%
• 2 倍稀释：预期 Ataxin 2 浓度 1415 pg/mL，实测浓度 1272 pg/mL，稀释回收率 90%
• 4 倍稀释：预期 Ataxin 2 浓度 708 pg/mL，实测浓度 639 pg/mL，稀释回收率 90%
• 8 倍稀释：预期 Ataxin 2 浓度 354 pg/mL，实测浓度 338 pg/mL，稀释回收率 95%
• 16 倍稀释：预期 Ataxin 2 浓度 177 pg/mL，实测浓度 174 pg/mL，稀释回收率 98%
• 平均稀释回收率：98%

注：实验获得的优异回收率表明该检测具有良好的稀释线性；样本为转染野生型 Ataxin 2 的 HEK293 细胞裂解液，在裂解缓冲液中进行系列稀释。

检测验证

ALS 背景下星形孢菌素（Staurosporine）处理对 Ataxin 2 检测的影响

将 HeLa 细胞以每孔 100,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中，在 37°C、5% 二氧化碳条件下培养 24 小时。移除细胞培养基后，加入 50 微升浓度为 1 微摩尔 / 升的星形孢菌素溶液（溶于细胞培养基），在 37°C、5% 二氧化碳条件下继续处理 6 小时。随后移除培养基，加入 50 微升裂解缓冲液，振荡孵育 30 分钟。裂解液可选择是否采用 TDP-43 聚集试剂盒中的解聚方案处理，之后取 16 微升裂解液转移至 384 孔板，每孔加入 4 微升 HTRF Ataxin 2 或 HTRF 总 TDP-43 检测试剂，孵育过夜后记录信号。（图示：4assay-validation-ataxin2-64ata2peg-64ata2peh-64ata2pey-01.svg，星形孢菌素处理相关检测验证图示）结果显示，星形孢菌素处理后，Ataxin 2 和 TDP-43 的聚集均有所增加，这与文献中描述的两种蛋白之间的关系一致。

人 / 小鼠 Ataxin 2 试剂盒在 KO 细胞系中的选择性

使用 HAP-1 敲除（KO）细胞系评估检测的选择性，采用 Horizon 公司的两种 Ataxin 2 KO 细胞系（一种缺失 7 个碱基对，另一种缺失 67 个碱基对）进行测试。（图示：5assay-validation-ataxin2-64ata2peg-64ata2peh-64ata2pey-02.svg，KO 细胞系选择性相关检测验证图示）将每种细胞系的 100,000 个细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% 二氧化碳条件下培养 24 小时。移除培养基后，每孔加入 50 微升裂解缓冲液，振荡 30 分钟，随后将裂解液转移至 384 孔板进行检测。每孔加入 4 微升 HTRF Ataxin 2 检测试剂，孵育过夜后记录 HTRF 信号。结果显示，Ataxin 3-KO 细胞系中可正常检测到 Ataxin 2，而 Ataxin 2-KO 细胞系中 Ataxin 2 的检测信号大幅降低或完全未检测到，表明该检测相对于 Ataxin 3 对 Ataxin 2 具有良好的选择性。

人 / 小鼠 Ataxin 2 试剂盒对 Ataxin 2 突变体的敏感性

为验证对不同突变体的兼容性，设计了 4 种质粒：一种含野生型 Ataxin 2 蛋白序列，另外 3 种分别含长度递增的多聚谷氨酰胺（polyQ）重复基序（分别为 30、54 和 108 个）。（图示：6assay-validation-ataxin2-64ata2peg-64ata2peh-64ata2pey-mutant-detection.svg，突变体敏感性相关检测验证图示）将 Ataxin 2 HAP1 KO 细胞系（缺失 7 个碱基对）在 T175 培养瓶中培养至融合。将细胞与不同质粒共孵育 6 小时进行转染，随后移除转染培养基并加入细胞培养基继续培养 24 小时。每个培养瓶加入 3 毫升裂解缓冲液裂解细胞，裂解液可选择是否采用解聚方案处理，之后取 16 微升样本转移至 384 孔板，每孔加入 4 微升 HTRF Ataxin 2 检测试剂，孵育过夜后记录 HTRF 信号。结果显示，该检测可识别突变型和野生型 Ataxin 2 蛋白。

人 / 小鼠 Ataxin 2 试剂盒在细胞系中的检测效果

选择神经细胞模型：人源 SH-SY5Y 细胞、鼠源 Neuro2A 细胞，同时评估人源 HeLa 细胞。（图示：7assay-validation-ataxin2_64ata2peg-64ata2peh-64ata2pey-versatility.svg，细胞系检测相关图示）将不同细胞系的 200,000 个、100,000 个或 50,000 个细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% 二氧化碳条件下培养 24 小时。移除培养基后，每孔加入 50 微升裂解缓冲液，振荡 30 分钟，随后将裂解液转移至 384 孔板进行检测。每孔加入 4 微升 HTRF Ataxin 2 检测试剂，孵育过夜后记录 HTRF 信号。

简化通路

Ataxin 2 信号通路

Ataxin 2 与 TDP-43 的 mRNA 结合，会增加 mRNA 的稳定性，进而促进蛋白表达。这种失调会影响 TDP-43 的蛋白稳态，并推动 ALS 的发病。（图示：8pathway-ataxin2-64ata2peg-64ata2peh-64ata2pey.svg，Ataxin 2 信号通路相关图示）TDP-43（TAR DNA 结合蛋白 43）是一种 DNA 和 RNA 结合蛋白，在 RNA 代谢中发挥关键作用。它主要定位于细胞核，可在细胞核与细胞质之间穿梭。在应激或突变等病理条件下，TDP-43 会在细胞质中异常定位，并可能被切割为 C 端片段，导致泛素化和过度磷酸化的毒性聚集物积累，进而形成不溶性包涵体。异常定位的可溶性 TDP-43 会被泛素化，随后通过蛋白酶体降解；而自噬系统会在可能的情况下尝试清除不溶性聚集物。

产品规格

其他规格

• 应用领域（Application）：蛋白质定量（Protein Quantification）
• 品牌（Brand）：HTRF
• 检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光技术）
• 裂解缓冲液兼容性（Lysis Buffer Compatibility）：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
• 产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
• 样本体积（Sample Volume）：16 微升（16 µL）
• 运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：生物标志物（Biomarkers）
• 靶标物种（Target Species）：人（Human）、小鼠（Mouse）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术）
• 单位规格（Unit Size）：500 个检测点（500 assay points）