产品概述

补体依赖的细胞毒性是抗体的重要效应功能。经典补体途径的激活始于补体蛋白 C1q 与结合在细胞表面靶抗原上的免疫球蛋白 Fc 段结合，这种相互作用会触发循环补体蛋白的序贯酶促激活，最终形成介导靶细胞裂解的膜攻击复合物。C1q 结合能力及由此产生的 CDC 活性会影响治疗性单克隆抗体的安全性和有效性，因此在研发过程中需要对其进行表征。目前，通过改造 IgG 抗体的 Fc 段来增强或降低生物制剂募集补体的能力，是一个活跃的研究领域。人 C1q 结合试剂盒用于检测溶液中聚集型 IgG 抗体的 Fc 段与人 C1q 的结合情况。

工作原理

人 C1q 结合检测原理

HTRF 人 C1q 结合检测可在缓冲溶液中测定 IgG 抗体 Fc 段与人 C1q 的结合。与传统需将抗体固定在固相载体上的方法不同，该检测采用均相通用格式，可对抗体进行简单快速的表征。实验中，生物素化抗人 IgG Fab 抗体与链霉亲和素复合，用于在溶液中捕获并聚集待测抗体；结合人 C1q 的抗体通过夹心检测格式进行定量，具体采用铕穴状化合物标记的抗 C1q 抗体和 d2 标记的链霉亲和素。当两个结合伴侣相互作用时，供体荧光团与受体荧光团近距离接触，进而产生荧光共振能量转移信号，信号强度与抗体 Fc 段与人 C1q 的相互作用能力呈正相关。（标注：Principle of the HTRF human C1q binding assay，对应 “人 C1q 结合检测原理示意图”）

人 C1q 结合检测流程

人 C1q 结合检测可在 96 孔或 384 孔小体积白色检测板中进行，最终检测体积为 20 微升。依次加入检测试剂后，仅需 1 步孵育即可完成检测。具体操作如下：将待测抗体直接加入检测板，随后加入预混液，再加入人 C1q 蛋白和铕穴状化合物标记的抗 C1q 抗体；在室温下孵育 3 小时后，可在兼容 HTRF 的检测仪上记录 FRET 信号，无需洗涤步骤。该流程可灵活缩小或扩大规模，只需按比例调整各试剂的添加体积即可。（标注：human -C1q-binding-kit-2.svg，对应 “人 C1q 结合检测流程示意图”）

检测验证

人 IgG 同种型对照的结合特征

将纯化的人 IgG1、IgG2 和 IgG4 同种型对照抗体用稀释液 #12 进行系列稀释，然后在人 C1q 结合检测中进行测试。各剂量反应结合曲线的信号强度显示，人 IgG1 能有效结合 C1q，人 IgG2 与该补体成分的相互作用较弱，而人 IgG4 不与 C1q 结合。这些结果与文献报道一致。（标注：Validation of human C1q binding assay with human IgG isotype controls，对应 “人 IgG 同种型对照验证人 C1q 结合检测示意图”）

利妥昔单抗变体的结合特征

在人 C1q 结合检测中，同时测试治疗性抗 CD20 抗体利妥昔单抗及其以下变体：非岩藻糖基化利妥昔单抗、非糖基化利妥昔单抗、利妥昔单抗 IgG2 同种型和利妥昔单抗 IgG4 同种型。正如预期，与利妥昔单抗相比，非岩藻糖基化抗体的 Fc 结构域缺失岩藻糖残基，并未引起 C1q 结合的可检测变化；相反，非糖基化变体的相互作用能力发生改变，表明抗体 Fc 段糖基化对 Fc 介导的效应机制至关重要；最后，同种型从 IgG1 转换为 IgG2 或 IgG4 会导致抗体结合 C1q 的能力显著下降或完全丧失。（标注：Validation of human C1q binding assay with Rituximab variants，对应 “利妥昔单抗变体验证人 C1q 结合检测示意图”）

治疗性 I 型和 II 型抗 CD20 抗体的结合特征

在人 C1q 结合检测中测试治疗性抗 CD20 抗体利妥昔单抗和奥法木单抗。II 型抗 CD20 抗体奥法木单抗产生的信号低于 I 型抗 CD20 抗体利妥昔单抗，表明其结合 C1q 的能力较弱，该结果与文献报道一致。（标注：Validation of human C1q binding assay with therapeutic type I & type II anti-CD20 antibodies，对应 “I 型和 II 型治疗性抗 CD20 抗体验证人 C1q 结合检测示意图”）

西妥昔单抗变体的结合特征

在人 C1q 结合检测中，同时测试治疗性抗 EGFR 抗体西妥昔单抗及其以下变体：非糖基化西妥昔单抗和西妥昔单抗 IgG2 同种型。正如预期，非糖基化变体的结合能力发生改变，表明抗体 Fc 段糖基化对 Fc 介导的效应机制至关重要；同种型从 IgG1 转换为 IgG2 也会导致抗体与 C1q 的相互作用能力显著下降。（标注：Validation of human C1q binding assay with Cetuximab variants，对应 “西妥昔单抗变体验证人 C1q 结合检测示意图”）

伊匹木单抗及其 IgG2 同种型变体的结合特征

在人 C1q 结合检测中，同时测试治疗性抗 CTLA-4 抗体伊匹木单抗及其 IgG2 同种型变体。生物制剂与其变体之间观察到的信号下降表明，同种型从 IgG1 转换为 IgG2 会导致抗体结合 C1q 的能力显著丧失。（标注：Validation of human C1q binding assay with Ipilimumab and IgG2 isotype variant，对应 “伊匹木单抗及其 IgG2 同种型变体验证人 C1q 结合检测示意图”）

治疗性抗 PD-L1 和抗 PD-1 抗体的结合特征

在人 C1q 结合检测中测试治疗性抗体阿替利珠单抗和斯帕妥珠单抗。正如预期，抗 PD-L1 IgG1 抗体阿替利珠单抗显示出与 C1q 的强结合，而抗 PD-1 IgG4 抗体斯帕妥珠单抗不具备与 C1q 相互作用的能力。（标注：Validation of human C1q binding assay with therapeutic anti-PD-L1 & anti-PD-1 antibodies，对应 “治疗性抗 PD-L1 和抗 PD-1 抗体验证人 C1q 结合检测示意图”）

治疗性抗 TNF-α 抗体的结合特征

在人 C1q 结合检测中测试治疗性抗 TNF-α 抗体英夫利昔单抗和阿达木单抗。结合剂量反应曲线显示出相似的特征和信号强度，表明两种抗 TNF-α 抗体与 C1q 的相互作用能力相同。（标注：Validation of human C1q binding assay with therapeutic anti-TNF-α antibodies，对应 “治疗性抗 TNF-α 抗体验证人 C1q 结合检测示意图”）

产品规格

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用
• 自动化兼容性：是
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF
• 产品类别：试剂盒
• 样品体积：5 微升
• 运输条件：干冰运输
• 靶标类别：结合实验
• 靶标物种：人
• 技术平台：TR-FRET
• 治疗领域：炎症、肿瘤与炎症
• 单位规格：500 次检测