新生儿 Fc 受体(FcRn)是一种存在于胎盘的 Fc 受体,其独特功能是促进 IgG 从母体向发育中的胎儿转运。该受体还在调节血液中 IgG 和白蛋白的半衰期方面发挥重要作用,通过 FcRn 介导的转胞吞过程影响药代动力学参数。FcRn 试剂盒用于检测 Fc 结构域分子与 FcRn 受体的结合情况。
FcRn 受体生化结合检测采用竞争法,涉及生物素化的 FcRn 受体胞外域(与铽穴状化合物标记的链霉亲和素结合)以及 d2 标记的人 IgG1。未标记的抗体或 Fc 融合药物与 d2 标记的 IgG1 竞争结合受体,导致荧光共振能量转移信号降低。(标注:fcrn-binding-kit,对应 “FcRn 结合试剂盒原理示意图”)
FcRn 生化结合检测在试剂分配后仅需 1 步孵育。首先加入预标记铽穴状化合物的 FcRn 胞外域,随后加入样品和 d2 标记的 IgG1;在室温下孵育 2 小时后即可读取信号。(标注:fcrn-binding-kit,对应 “FcRn 结合试剂盒流程示意图”)
将人和小鼠的 IgG1 同种型抗体用试剂盒提供的稀释缓冲液从 1 毫克 / 毫升开始进行系列稀释,随后以竞争模式进行检测。结果显示,人 IgG1 抗体以剂量依赖方式有效置换 d2 标记的 IgG1 抗体,而小鼠 IgG1 浓度增加时荧光共振能量转移信号保持恒定。这些数据表明,FcRn 结合试剂盒对人 IgG 具有特异性,不适用于其他物种的 IgG。(标注:fcrn-binding-kit,对应 “FcRn 结合试剂盒物种选择性验证示意图”)
使用 FcRn 结合试剂盒研究了两种经 FDA 批准的抗体(抗 CD20 抗体利妥昔单抗和抗 PD-1 抗体帕博利珠单抗)的抑制作用。将抗 CD20 IgG1 抗体利妥昔单抗和抗 PD-1 IgG4 抗体帕博利珠单抗用试剂盒提供的稀释缓冲液从 1 毫克 / 毫升开始进行系列稀释,以竞争剂量反应模式进行检测。结果显示,两种抗体均以剂量依赖方式有效与 d2 标记的抗体竞争结合受体,且表现出相似的半数抑制浓度。该结果表明,该试剂盒适用于人 IgG1 和 IgG4 抗体。(标注:fcrn-binding-kit,对应 “利妥昔单抗和帕博利珠单抗抑制作用验证示意图”)