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人源血红素加氧酶 1(HO-1)是一种催化血红素降解的酶,可产生胆绿素、亚铁离子和一氧化碳。HO-1 是一种应激诱导型同工酶,可被氧化应激、缺氧、重金属、细胞因子等应激条件诱导表达。人源血红素加氧酶试剂盒可快速监测细胞产生的 HO-1。
人源血红素加氧酶检测采用双抗夹心免疫分析法,涉及两种特异性人源血红素加氧酶抗体,分别标记 Europium Cryptate(供体)和 d2(受体)。信号强度与样本中血红素加氧酶的浓度成正比。(图示:human-heme-oxygenase-kit,人源血红素加氧酶检测原理相关图示)
人源血红素加氧酶试剂盒采用双板检测方案:细胞在同一培养板中接种、刺激处理并裂解,随后将裂解液转移至检测板,用于人源 HO-1 的检测。该方案可监测细胞的活力和融合度。标记 HTRF 荧光团的抗体可预先混合,通过单次加样步骤加入,进一步简化检测流程。通过按比例调整各试剂的添加体积,检测可在 96 孔至 384 孔板中进行。(图示:human-heme-oxygenase-kit,人源血红素加氧酶检测方案相关图示)
以 25 ng/mL 人源血红素加氧酶 1 蛋白为起始浓度进行 2 倍系列稀释,采用四参数 logistic(4PL)模型拟合(权重为 1/Y²)。该数据不可替代实验室实测数据,仅作为示例参考。(图示:human-heme-oxygenase-kit,人源血红素加氧酶标准曲线相关图示)
将 HEPG2 细胞以每孔 50,000 个细胞的密度接种,在存在或不存在 10 µM 氯化镉的条件下刺激 6 小时。移除上清液后,使用试剂盒提供的裂解缓冲液裂解细胞,稀释 5 倍后加样。随后加入试剂盒中的标记抗体,4 小时后读取板信号。结果显示,与未刺激细胞相比,HTRF 比值增加 2.9 倍,表明镉离子刺激可诱导人源 HO-1 的产生。(图示:human-heme-oxygenase-kit,HEPG2 细胞中 HO-1 产生相关图示)