杂交瘤技术仍是制备治疗用抗体最常用的技术。从免疫动物中制备和筛选杂交瘤的过程耗时较长,且仅能抽样检测适应性免疫反应中产生的部分抗体。因此,筛选杂交瘤上清液与目标抗原的高效结合能力至关重要。
杂交瘤上清液与 GST 标签抗原的结合检测采用夹心免疫分析方法,涉及均相时间分辨荧光供体标记的抗 GST 抗体和受体染料标记的抗小鼠抗体。杂交瘤克隆产生的鼠源抗体与 GST 标签靶标结合后,会产生均相时间分辨荧光信号。(标注:hybridoma-binding-kit,对应 “杂交瘤结合试剂盒原理示意图”)
杂交瘤结合试剂盒可在 96 孔或 384 孔小体积白色检测板中进行,最终检测体积为 20 微升。具体操作如下:将样品直接加入检测板,随后加入 GST 抗原,再加入均相时间分辨荧光试剂(铕穴状化合物标记的抗 GST 抗体和 d2 标记的抗小鼠抗体)。该流程可灵活缩小或扩大规模,只需按比例调整各试剂的添加体积即可。(标注:hybridoma-binding-kit,对应 “杂交瘤结合试剂盒流程示意图”)
采用铕穴状化合物标记的抗 GST 抗体和 d2 标记的抗小鼠抗体,检测与 GST 标签融合的 β- 连环蛋白的结合物。杂交瘤结合试剂盒检测流程如下:使用 5 纳摩尔 GST 标签 β- 连环蛋白,在室温下孵育 1 小时。图表显示阳性样品(红色)和阴性样品(橙色)产生的信号,同时使用杂交瘤(GST 抗原)对照验证实验有效性。(标注:hybridoma-binding-kit,对应 “GST 标签 β- 连环蛋白结合检测示意图”)