产品概述

切割型 PARP（Asp214）试剂盒可特异性定量检测人、鼠、猴体内 PARP-1 的 89 kDa 大片段（内源性水平）。PARP-1 是半胱天冬酶 3（caspase 3）和半胱天冬酶 7（caspase 7）下游的核心分子，而这两种半胱天冬酶可被外源性和内源性凋亡通路激活，因此切割型 PARP-1 是细胞凋亡的关键标志物。凋亡调控异常与多种疾病相关：凋亡不足可导致癌症、自身免疫病、持续性感染等；凋亡过度则可能引发神经退行性疾病和缺血性损伤。

工作原理

检测原理

切割型 PARP 检测采用夹心免疫分析技术，使用两种特异性抗 PARP-1 p85 片段单克隆抗体：一种标记铕穴状化合物（Eu³⁺-Cryptate，供体），另一种标记 d2（受体）。供体与受体的近距离接触产生荧光 TR-FRET 信号，信号强度与凋亡细胞数量成正比。该方案优化适用于 384 孔板格式，可灵活实现微型化或扩大化操作；细胞裂解后，通过该试剂盒可半定量检测切割型 PARP-1 p85 片段。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-principle-cleaved-parp-1 为图表标识，对应 “切割型 PARP 检测原理”）

检测流程

采用双板实验方案，灵活性更高：细胞在 96 孔培养板中接种并处理，检测时将裂解液转移至 384 孔小体积（sv）检测板，加入检测试剂即可。检测试剂可预先混合，单次加样直接检测，全程无需洗涤步骤；同时可在合适的细胞培养板中监测细胞活力与汇合度。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-protocol-cleaved-parp-1 为图表标识，对应 “切割型 PARP 检测流程”）

检测验证

HTRF 检测与 Western Blot 对比

Jurkat 细胞在 T175 培养瓶中 37°C、5% CO₂条件下培养，经星形孢菌素（staurosporine）刺激 4 小时后离心，移除培养基，用 3 mL 补充型裂解缓冲液室温裂解 30 分钟，离心 10 分钟收集可溶性组分。将细胞裂解液用补充型裂解缓冲液系列稀释，取 16 µL 各稀释液分别进行 Western Blot 和 HTRF 平行检测。结果显示，HTRF 检测仅需 3125 个细胞即可获得最低检测信号，而 Western Blot 需 12500 个细胞，HTRF 检测的灵敏度优于 Western Blot。（标注：assay-validation-parp-cleaved-asp214-1 为图表标识，对应 “与 Western Blot 对比结果”）

星形孢菌素处理的 HeLa 细胞中切割型 PARP-1 检测

将 50,000 个人宫颈癌细胞（HeLa）接种于 96 孔板，37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时，用不同浓度的星形孢菌素处理 4 小时后移除培养基，加入 50 µL 裂解缓冲液室温温和振荡裂解 30 分钟。取 16 µL 裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，加入 4 µL HTRF 切割型 PARP（Asp214）检测试剂，孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。（标注：assay-validation-parp-cleaved-asp214-2 为图表标识，对应 “HeLa 细胞凋亡检测结果”）

星形孢菌素处理的 C2C12 细胞中切割型 PARP-1 检测

将 50,000 个小鼠成肌细胞（C2C12）接种于 96 孔板，37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时，用不同浓度的星形孢菌素处理 4 小时后移除培养基，加入 50 µL 裂解缓冲液室温温和振荡裂解 30 分钟。取 16 µL 裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，加入 4 µL HTRF 切割型 PARP（Asp214）检测试剂，孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。（标注：assay-validation-parp-cleaved-asp214-3 为图表标识，对应 “C2C12 细胞凋亡检测结果”）

简化通路

切割型 PARP 通路

效应型前半胱天冬酶 3（pro-caspase 3）可在 Asp214 位点切割 PARP，引发凋亡，其激活主要通过两条通路：

1. 外源性通路：由肿瘤坏死因子 α（TNFα）、Fas 配体（FasL）、载脂蛋白 L（ApoL）等死亡配体与死亡受体结合激活，进而激活起始型前半胱天冬酶 8（procaspase-8）；
2. 内源性通路（线粒体通路）：由细胞损伤（如应激、辐射、毒素、缺氧、生长因子缺乏等）激活，诱导 BAD 等促凋亡因子活化，进而激活起始型前半胱天冬酶 9（procaspase-9）。

在死亡配体刺激或细胞损伤作用下，外源性或内源性凋亡通路被激活，参与 DNA 损伤修复的核酶 PARP-1（116 kDa）被活化的半胱天冬酶 3 和 7 在 Asp214 与 Gly215 之间切割，使 N 端 DNA 结合域 p25（24 kDa）与 C 端催化域 p85（89 kDa）分离，导致酶失活，最终引发 DNA 片段化和细胞凋亡。因此，切割型 PARP-1 被视为凋亡的核心标志物。（标注：biomarkers-tab4-cleaved-parp-1-pathway-64parpeg-64parpeh.svg 为图表标识，对应 “切割型 PARP 简化通路”）

产品规格

• 应用领域：蛋白定量（Protein Quantification）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：试剂盒（Kit）
• 样本体积：16 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：生物标志物（Biomarkers）
• 靶标物种：人（Human）、鼠（Mouse）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：心血管疾病（Cardiovascular）、感染性疾病（Infectious Diseases）、代谢 / 糖尿病（Metabolism/Diabetes）、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化（NASH/Fibrosis）、神经科学（Neuroscience）、罕见病（Rare Diseases）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）