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HTRF AKT2 P-S473 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化 AKT2（Ser473）试剂盒旨在对丝氨酸 473 位磷酸化的 AKT2 调控进行可靠定量。AKT 也被称为蛋白激酶 B（PKB），是一种癌基因，在控制细胞凋亡、细胞增殖、转录、细胞迁移和葡萄糖代谢中发挥关键作用。其中，AKT2 在胰岛素通路中起着至关重要的作用，因此在糖尿病和代谢研究中具有重要应用。

工作原理

磷酸化 AKT2（Ser473）检测原理

磷酸化 AKT2（Ser473）检测用于测量丝氨酸 473 位磷酸化的 AKT2。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 AKT2（Ser473）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET（荧光共振能量转移）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 AKT2（Ser473）双板检测方案

双板方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解液转移至 384 孔低体积检测板，再加入磷酸化 AKT2（Ser473）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

磷酸化 AKT2（Ser473）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 AKT2（Ser473）可在单个微孔板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

磷酸化 AKT2 检测：封闭肽的抑制作用

用人类 IGF-1 刺激 SH-SY5Y 细胞 15 分钟。刺激后，移除培养基，加入 1X 裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。将 14 µL 裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，加入 2 µL 不同浓度的 AKT2 特异性封闭肽，随后加入 4 µL HTRF 磷酸化 AKT2（Ser473）检测试剂。室温孵育过夜后记录 HTRF 信号。

简化通路

AKT 简化通路

AKT（或蛋白激酶 B）在控制细胞存活和凋亡中起关键作用。这种丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶受胰岛素、多种生长因子和存活因子调控，在涉及 PI3 激酶的渥曼青霉素敏感通路中发挥作用。当 AKT 的 plekstrin 同源（PH）结构域与磷酸肌醇结合时，AKT 可被两种不同的激酶磷酸化：PDK1（磷酸化苏氨酸 308 位）和 mTORC2（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物 2，磷酸化丝氨酸 473 位），从而激活 AKT。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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