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HTRF NDRG1 P-T346 KIT - 50K PTS

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品牌： Revvity

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概述

磷酸化 NDRG1（Thr346）细胞检测试剂盒是测量苏氨酸 346（Thr346）位点磷酸化 NDRG1 的理想选择，也是癌症和血管生成研究的有力工具。在常与恶性肿瘤进展相关的缺氧条件下，NDRG1 会被 HIF1-α 上调。NDRG1 是一种转移抑制因子，通过阻断血管生成信号通路发挥作用。

工作原理

磷酸化 NDRG1（Thr346）检测原理

磷酸化 NDRG1（Thr346）检测用于测量 Thr346 位点磷酸化的 NDRG1。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 NDRG1（Thr346）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成涉及两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 NDRG1（Thr346）双板检测方案

双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，之后再加入磷酸化 NDRG1（Thr346）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 NDRG1（Thr346）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 NDRG1（Thr346）可在单个培养板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

在 HeLa 细胞上检测磷酸化 NDRG1（Thr346）

将不同密度的 HeLa 细胞接种到 96 孔板中，过夜孵育。用 25 µL 不同浓度的 AZD8055（一种 ATP 竞争性 mTOR 抑制剂）刺激细胞 2 小时（37°C、5% CO₂）。刺激后，加入 25µL 4X 裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。将 16 µL 裂解物转移到 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4 µL HTRF 磷酸化 NDRG1（Thr346）检测试剂。室温孵育过夜后记录 HTRF 信号。

在 HeLa 细胞上检测磷酸化 NDRG1（Thr346）

将不同密度（100K、50K、25K 和 12.5K）的 HeLa 细胞以 50µL 体系接种到 96 孔板中，在 40 µM Dp44mT 存在下孵育 24 小时。然后，吸去培养基，加入 50µL 1X 裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。将 16 µL 裂解物转移到 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4 µL HTRF 磷酸化 NDRG1（Thr346）检测试剂。室温孵育过夜后记录 HTRF 信号。

规格参数

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样本体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：63ADK092PEY

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