HTRF ADV.ERK P-T202/Y204 KIT - 50K PTS

高级磷酸化 ERK 检测试剂盒旨在对苏氨酸 202 / 酪氨酸 204（Thr202/Tyr204）位点的 ERK 磷酸化进行稳定且高灵敏度的定量分析，可作为 MAPK 通路的读数指标。其简单的 “混合即读” 流程省去了所有洗涤步骤，能实现更快速的分析并获得高质量结果。总 ERK1/2 检测与磷酸化或高级磷酸化 ERK 试剂盒的缓冲液兼容，因此同一裂解物可用于分析总蛋白和磷酸化蛋白群体。该试剂盒是 G 蛋白偶联受体（GPCR）和受体酪氨酸激酶（RTK）靶向筛选的理想选择。

高级磷酸化 ERK（Thr202/Tyr204）检测原理

高级磷酸化 ERK（Thr202/Tyr204）双板检测方案

高级磷酸化 ERK（Thr202/Tyr204）单板检测方案

检测验证

将 HEK293 细胞培养 48 小时，然后用 50 nM 表皮生长因子（EGF）刺激 5 分钟。移除培养基并裂解细胞后，收集细胞裂解物并离心 10 分钟。对裂解物进行系列稀释，同时通过蛋白质印迹法和 HTRF 高级磷酸化 ERK 检测进行分析。使用 HTRF 高级磷酸化 ERK（Thr202/Tyr204）检测时，仅需 300 个细胞即可实现最小信号检测，而蛋白质印迹法则需要 10,000 个细胞才能产生信号。HTRF 高级磷酸化 ERK 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 30 倍，且具有极佳的相关性。

高级磷酸化 ERK 检测能够研究 MAPK 通路抑制剂化合物对基础活化水平的影响，无需对通路进行刺激。由于其高交叉反应性，高级磷酸化 ERK 检测与多种模型物种高度兼容，包括人、小鼠、大鼠、狗、猴、仓鼠、水貂、牛、猪、黑腹果蝇和斑马鱼。所有实验均采用贴壁细胞的双板检测方案：接种一天后，所有细胞系均用相应抑制剂在 37°C、5% CO₂条件下处理 30 分钟。

高级磷酸化 ERK 检测试剂盒非常适合监测胰腺 β 细胞系或患者外周血单个核细胞（PBMCs）中的激动剂刺激。实验在两种胰腺 β 细胞系（Ins-1E 和 Min6）上进行，采用双板检测方案：两种细胞系均以 70,000 个细胞 / 孔的密度接种 4 天，洗涤后在不含葡萄糖的克雷布斯 - 林格缓冲液中孵育；饥饿 2 小时后，用葡萄糖刺激细胞。外周血单个核细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种，然后用佛波酯（PMA）在 37°C、5% CO₂条件下刺激 30 分钟。

肿瘤异种移植物中磷酸化 ERK 的灵敏检测

磷酸化 ERK 检测的优化细胞密度

MAPK/ERK 信号级联可被多种参与生长和分化的受体激活。核心信号转导级联调控众多细胞过程，包括黏附、迁移、凋亡、分化和代谢。MEK1/2 催化 ERK1/2 在 Tyr204 和 Thr202 位点的磷酸化；作为响应，ERK 会磷酸化数百种细胞质和细胞核底物。MAPK 信号的广泛复杂性和多样性使 ERK 成为生物学中关键的调节因子和主要信号节点。

ERK 调节在 GPCR 信号中起重要作用，因此是重要的可测量 GPCR 读数指标。GPCR 通过 G 蛋白发挥作用，调控广泛的细胞功能。刺激后，这些受体激活效应器（如腺苷酸环化酶和磷脂酶 C），不仅影响细胞内第二信使（如 cAMP 和 Ca²⁺）的浓度，还介导 ERK1/2 的磷酸化。研究表明，GPCR 还可通过不依赖 G 蛋白但依赖 β- 抑制蛋白的方式介导 ERK1/2 的激活。

其他规格

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• 应用领域：细胞信号传导
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF
• 分子修饰：磷酸化
• 产品类别：试剂盒
• 样品体积：16 µL
• 运输条件：干冰运输
• 靶标：ERK1/2
• 靶标类别：磷酸化蛋白
• 靶标物种：人、小鼠
• 技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
• 治疗领域：代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤学与炎症、罕见病
• 单位规格：50,000 个检测点