当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF (H) H2AX TOTAL KIT - 50K PTS

HTRF (H) H2AX TOTAL KIT - 50K PTS

分享给好友

rvty_ls_sds_64H2AXTPEG_US rvty_ls_sds_64H2AXTPEG_UK rvty_ls_sds_64H2AXTPEG_ITA rvty_ls_sds_64H2AXTPEG_SPA rvty_ls_sds_64H2AXTPEG_ELL rvty_ls_sds_64H2AXTPEG_DEU rvty_ls_sds_64H2AXTPEG_FRA

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

总 H2AX 试剂盒可对人组蛋白变体 H2AX 进行定量检测。当双链 DNA 断裂时（无论是由于电离辐射还是内源性生理过程），H2AX 的 Ser139 位点会发生特异性磷酸化。这种被称为 γ-H2AX（磷酸化 Ser139）的修饰会触发细胞周期停滞和 DNA 损伤应答修复，这使得该检测特别适用于研究基因组稳定性、细胞周期、DNA 修复，更广泛地说，还可作为癌症和衰老过程研究的生物标志物。

工作原理

总 H2AX 检测原理

总 H2AX 检测用于定量细胞裂解物中 H2AX 的表达水平。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 H2AX 检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 H2AX 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的形式，可用于评估蛋白质的表达水平。

人总 H2AX 检测试剂盒

总 H2AX 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，之后再加入总 H2AX HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

人总 H2AX 检测试剂盒

总 H2AX 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 H2AX 可在单个板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

人总 H2AX 检测试剂盒

检测验证

使用新制癌菌素化合物进行药理学验证

将 HEK293 细胞接种到 96 孔板中（12,500 个细胞 / 孔），在 37°C、5% CO₂条件下培养 24 小时。移除细胞培养基后，用不同浓度的新制癌菌素（一种 DNA 损伤剂）处理细胞。孵育 30 分钟后，移除细胞培养基，向每个孔中加入 50 µL 补充的 4 号裂解缓冲液（1X）。细胞裂解 45 分钟后，将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 总 H2AX 或磷酸化 H2AX（Ser139）检测抗体。孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。

新制癌菌素触发了磷酸化 H2AX（Ser139）蛋白的剂量依赖性增加，而 H2AX 的表达水平保持稳定。

人总 H2AX 检测试剂盒

使用 H2AX 敲除细胞系对 HTRF 总 H2AX 检测的特异性验证

使用 HTRF 总 H2AX 试剂盒在 HAP1 细胞（野生型，WT）和 H2AX 敲除（KO）的 HAP1 细胞中评估人 H2AX 的表达水平。预先对细胞密度进行了优化，以确保 HTRF 检测在试剂盒的动态范围内进行（数据未显示）。

将这些细胞系接种到 96 孔板中（50,000 个细胞 / 孔），在 37°C、5% CO₂条件下培养 24 小时。移除培养基后，用 50 µL 补充的 4 号裂解缓冲液（1X）裂解细胞 45 分钟，然后将 16 µL 细胞裂解物转移至小体积白色微孔板中，随后加入 4 µL 预混合的检测试剂。在室温下孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。

在 HAP1 H2AX 敲除细胞中，HTRF 信号与非特异性信号（虚线）相当，表明 H2AX 基因被完全沉默，同时也证明了 HTRF 总 H2AX 试剂盒的特异性。

HAP1 敲除细胞系来自 Horizon Discovery 公司，编号为 HZGHC005630c003

HAP1 野生型细胞来自 Horizon Discovery 公司，编号为 C631

人总 H2AX 检测试剂盒

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
裂解缓冲液兼容性：1 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液
分子修饰：总（蛋白）
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白
目标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
单位规格：500 个检测点

没有数据

货号：64H2AXTPEY

一键复制

参考价格 ¥ 545226.97

产品规格

请咨询￥545226.97

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价