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HTRF S6RP P-S235/236 KIT - 500 PTS 磷酸化S6RP检测试剂盒 - 500测试

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概述

磷酸化 S6 核糖体蛋白（Ser235/236）细胞检测试剂盒可对丝氨酸 235/236 位点（Ser235/236）磷酸化的 S6 核糖体蛋白（磷酸化 S6RP）进行定量检测。该试剂盒可用于筛选受体激活调节剂及作用于上游通路事件的化合物，应用范围广泛，涵盖炎症 / 免疫学、代谢 / 糖尿病及肿瘤学等研究领域。

工作原理

磷酸化 S6RP（Ser235/236）检测原理

磷酸化 S6RP（Ser235/236）检测针对 Ser235/236 位点磷酸化的 S6RP 进行测定。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全板基检测，无需使用凝胶、进行电泳或转膜操作。
该检测采用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选，可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序；第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态，直接识别该蛋白质。当蛋白质发生磷酸化时，会形成由两种标记抗体共同参与的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样本中磷酸化蛋白质的浓度呈直接正相关，为 “免洗涤” 检测模式下评估蛋白质磷酸化状态提供了有效手段。

phospho-s6rp-ser235-236-assay-principle（图示：磷酸化 S6RP（Ser235/236）检测原理）

磷酸化 S6RP（Ser235/236）双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行细胞裂解，再将裂解液转移至 384 孔小体积检测板中，最后加入磷酸化 S6RP（Ser235/236）HTRF 检测试剂。此方案可实现对细胞活力及汇合度的监测。

phospho-s6rp-ser235-236-2-plate-assay-protocol（图示：磷酸化 S6RP（Ser235/236）双板检测方案）

磷酸化 S6RP（Ser235/236）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 S6RP（p-S6RP）可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激及裂解，无需洗涤步骤。此方案专为高通量筛选（HTS）设计，可在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

phospho-s6rp-ser235-236-1-plate-assay-protocol（图示：磷酸化 S6RP（Ser235/236）单板检测方案）

检测验证

基于磷酸化 S6RP（Ser235/236）细胞检测试剂盒的 HTRF 与 WB 方法对比

将 HeLa 细胞接种于 T175 培养瓶中，在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下培养 1 天。移除细胞培养液后，加入 3 毫升添加了补充剂的裂解缓冲液，孵育 30 分钟；离心 10 分钟后，收集可溶性上清液。取等量裂解液，分别采用 WB 法与 HTRF 法进行平行对比检测。结果显示，HTRF 磷酸化 S6RP 检测的灵敏度优于蛋白质印迹法。

assay-validation-s6rp-phospho-s235-236-1（图示：磷酸化 S6RP（Ser235/236）检测中 HTRF 与 WB 方法对比验证）

雷帕霉素对小鼠 NIH-3T3 细胞或人 HEK293 细胞的剂量效应

将小鼠 NIH-3T3 细胞或人 HEK293 细胞以不同密度（1.25×10⁴至 1×10⁵个细胞 / 孔）接种于经细胞培养处理的 96 孔板中。细胞经过夜血清饥饿处理后，加入浓度递增的雷帕霉素并作用 2 小时，随后用 20% 血清刺激 30 分钟。加入 200 微升（µL）添加了补充剂的裂解缓冲液，孵育 30 分钟以完成细胞裂解，最后采用双板磷酸化 S6RP 检测试剂盒方案对磷酸化 S6RP 进行测定。
注意：根据所用细胞系的不同，需优化裂解液体积（通常为 50µL 至 200µL）。

assay-validation-s6rp-phospho-s235-236-2（图示：雷帕霉素对细胞中磷酸化 S6RP 的剂量效应验证）

简化通路

磷酸化 S6RP 简化通路

核糖体负责催化蛋白质合成，由小亚基（40S）和大亚基（60S）组成。胞质 S6 核糖体蛋白（S6RP）是 40S 亚基的组成部分，其编码基因 RPS6 是核糖体中蛋白激酶的主要作用底物。
多种刺激信号可诱导 S6RP 发生磷酸化，包括生长因子、促肿瘤剂及促有丝分裂原等；而在细胞生长停滞时，S6RP 会发生去磷酸化。S6RP 蛋白可能通过对特定类别 mRNA 的选择性翻译，参与调控细胞生长与增殖过程。

phospho-pathway-s6rp-64rp6peg（图示：磷酸化 S6RP 相关简化通路）

规格参数

其他规格参数

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
裂解缓冲液兼容性：1 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
分子修饰类型：磷酸化
产品类别：试剂盒
样本体积：16 微升（µL）
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白质
靶标物种：人、小鼠
技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、肿瘤与炎症
单位规格：500 个检测点

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货号：64RP6PEG

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