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HTRF FGFR4 TOTAL KIT - CTRL LYSATE

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概述


该细胞裂解物为总 FGFR4 检测提供了一种验证方法。作为阳性对照，它能帮助研究人员在进行检测时避免出现任何检测问题。此裂解物来源于 MDA-MB-453 细胞。


规格


其他规格

  • 应用：细胞信号传导
  • 品牌：HTRF
  • 检测方式：HTRF
  • 分子修饰：总蛋白
  • 产品类别：对照裂解物
  • 运输条件：干冰运输
  • 靶标类别：磷蛋白
  • 靶标物种：人
  • 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
  • 治疗领域：肿瘤学与炎症
  • 单位规格：1 瓶


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line-height: var(--md-box-samantha-normal-text-line-height); overflow-anchor: auto; font-family: Inter, -apple-system, BlinkMacSystemFont, "Segoe UI", "SF Pro SC", "SF Pro Display", "SF Pro Icons", "PingFang SC", "Hiragino Sans GB", "Microsoft YaHei", "Helvetica Neue", Helvetica, Arial, sans-serif; text-wrap-mode: wrap; background-color: rgb(255, 255, 255); color: var(--md-box-samantha-normal-text-color) !important;">结果显示，Ramos 细胞中总 PLCγ2 的表达水平是 THP-1 细胞的两倍。


assay-validation-plc-gamma2-total-2（图示：总 PLCγ2 检测验证 2）

总 PLCγ2 HTRF 检测与蛋白质印迹法的比较

将人 B 细胞淋巴瘤 Ramos 细胞系在含完全培养基的 T175 培养瓶中，于 37°C、5% 二氧化碳条件下培养 48 小时。离心后，用 20 微克 / 毫升的抗人 IgM 抗体刺激细胞沉淀 5 分钟。随后加入 4 号裂解缓冲液（2 倍浓度），在室温下轻柔振荡裂解 30 分钟。


用补充后的裂解缓冲液对细胞裂解液进行系列稀释，取 16 微升各稀释度裂解液转移至小体积白色微孔板，再加入 4 微升总 PLCγ2 HTRF 检测试剂。取等量裂解液，通过蛋白质印迹法与 HTRF 法进行平行对比检测。


结果显示，使用总 PLCγ2 HTRF 检测时，每孔仅需 1000 个细胞即可检测到显著信号；而采用蛋白质印迹法时，需 2000 个细胞才能获得最低化学发光信号。因此，在此实验条件下，磷酸化 PLCγ2 HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的两倍。


assay-validation-plc-gamma2-total-3（图示：总 PLCγ2 检测验证 3）


简化通路

PLCγ2 信号通路简化图

PLCγ2（磷脂酶 Cγ2）是一种胞质酪氨酸激酶，在信号转导中发挥关键作用，尤其在免疫细胞（如 B 细胞和小胶质细胞 —— 脑内常驻巨噬细胞）中。


当 B 细胞或 TREM2/DAP12 受体复合物受到刺激时，PLCγ2 会与 SYK、BTK 和 BLNK（也称为 SLP-65）相互作用，通过其催化结构域的 Tyr1217 位点磷酸化而被激活。随后，PLCγ2 会将磷脂酰肌醇 4,5 - 二磷酸（PIP2）裂解为二酰甘油（DAG）和肌醇 1,4,5 - 三磷酸（IP3）。IP3 进而会促进钙释放，并将自身降解为肌醇 1 - 磷酸（IP1）。


这一过程会触发多种信号通路的激活和细胞反应，包括细胞激活、增殖和存活。


phospho-pathway-plcgamma2-total-kit-64plcg2tpeg（图示：PLCγ2 信号通路简化图）


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