HTRF BIOT.HEPARAN SULFATE-EU - 5K PTS 乙酰肝素酶K测量试剂-5,000测试

产品概述

该产品为同时标记生物素与铕 ³⁺穴状化合物的 HTRF 硫酸乙酰肝素底物，搭配链霉亲和素 - XL665（SA-XL665）使用时，可依托 HTRF 技术的高稳定性特性，实现对乙酰肝素酶活性的精准监测。乙酰肝素酶是一种能够裂解硫酸乙酰肝素的酶类，其裂解作用会释放出与肿瘤细胞增殖、转移及血管生成密切相关的生长因子，因此该底物在肿瘤相关机制研究及抑制剂筛选等场景中具有重要应用价值。

工作原理

检测原理

乙酰肝素酶活性检测的核心机制基于能量转移信号变化。该底物同时携带生物素和 Eu³⁺穴状化合物两种标记，当底物保持完整状态时，加入的 SA-XL665 会通过生物素 - 链霉亲和素的特异性结合靠近 Eu³⁺穴状化合物，进而发生能量转移并产生特定荧光信号；当体系中存在活性乙酰肝素酶时，酶会裂解硫酸乙酰肝素底物，导致 Eu³⁺穴状化合物与 SA-XL665 的空间距离拉远，能量转移过程中断，最终表现为 SA-XL665 的荧光信号显著降低。（标注：HTRF Biotin-Heparan sulfate-Eu cryptate reagent 1.svg，对应 “乙酰肝素酶活性检测原理示意图”）

检测流程

该检测采用两步法操作，具体步骤如下：

1. 乙酰肝素酶酶促反应阶段：将底物、乙酰肝素酶以及待检测化合物（若有）充分混合，置于 37℃环境下孵育 30 分钟（建议通过时间进程实验确定最佳孵育时长）。
2. 乙酰肝素酶活性检测阶段：向反应体系中加入链霉亲和素 - XL665（SA-XL665），随后检测荧光信号变化，以此判断乙酰肝素酶的活性水平。

（标注：HTRF Biotin-Heparan sulfate-Eu cryptate reagent 2.svg，对应 “乙酰肝素酶活性检测流程示意图”）

检测验证

1. 乙酰肝素酶酶促动力学验证使用不同浓度的乙酰肝素酶开展 HTRF 检测，在酶促反应进行不同时长后加入 SA-XL665 并检测荧光信号。实验结果清晰呈现了乙酰肝素酶浓度和反应时间对底物降解程度的影响。基于酶浓度 - 响应曲线的线性关系、酶消耗规律及孵育时间的综合分析，最终确定90 ng/mL 的乙酰肝素酶、37℃孵育 30 分钟为抑制剂筛选的最优实验条件。（标注：HTRF Biotin-Heparan sulfate-Eu cryptate reagent 3.svg，对应 “乙酰肝素酶酶促动力学验证数据图”）
2. 苏拉明抑制效应验证以 90 ng/mL 的乙酰肝素酶为实验体系，在室温条件下与不同浓度的苏拉明（已知乙酰肝素酶抑制剂）共同孵育 30 分钟，随后进行活性检测。实验结果显示，检测标准曲线的变异系数（CV）低于 3%，表明该检测方法具有良好的重复性；苏拉明对乙酰肝素酶的半数抑制浓度（IC₅₀）经计算为 4 μM，该数值与放射性检测方法得出的 1-10 μM 范围高度吻合，验证了该底物检测结果的可靠性。（标注：HTRF Biotin-Heparan sulfate-Eu cryptate reagent 4.svg、HTRF Biotin-Heparan sulfate-Eu cryptate reagent 5.svg，对应 “检测标准曲线及苏拉明抑制效应图”）

产品规格

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用检测、乙酰肝素酶活性监测及抑制剂筛选
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF
• 产品类别：荧光试剂
• 运输条件：干冰运输
• 靶标类别：结合检测
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 单位规格：5,000 次检测