HTRF BIOT.HEPARAN SULFATE-EU - 20K PTS

产品概述

该产品为同时标记生物素与铕 ³⁺穴状化合物的 HTRF 硫酸乙酰肝素底物，搭配 HTRF 链霉亲和素 - XL665（SA-XL665）使用，可依托 HTRF 技术的稳定特性，实现乙酰肝素酶活性的精准监测。乙酰肝素酶是能裂解硫酸乙酰肝素的酶，裂解后会释放生长因子，这类生长因子与肿瘤细胞增殖、转移及血管生成密切相关，该底物适用于相关机制研究及检测场景。

工作原理

检测原理

HTRF 乙酰肝素酶检测基于专属硫酸乙酰肝素底物，底物同时标记生物素与铕 ³⁺穴状化合物。活性乙酰肝素酶会裂解底物，导致能量转移中断，进而使 SA-XL665 的荧光发射信号降低，通过信号变化可监测乙酰肝素酶活性。（标注：HTRF Biotin-Heparan sulfate-Eu cryptate reagent 1.svg，对应 “乙酰肝素酶检测原理示意图”）

检测流程

检测采用两步法进行：1. 乙酰肝素酶酶促反应：将底物、乙酰肝素酶及可能的化合物混合，于 37℃孵育 30 分钟（建议通过时间进程研究确定最佳刺激时间）；2. 乙酰肝素酶活性检测：加入链霉亲和素 - XL665，后续完成信号检测即可。（标注：HTRF Biotin-Heparan sulfate-Eu cryptate reagent 2.svg，对应 “乙酰肝素酶检测流程示意图”）

检测验证

乙酰肝素酶酶促动力学验证

采用不同浓度的酶开展 HTRF 乙酰肝素酶检测，酶促反应进行不同时长后加入 SA-XL665 并检测发射信号，结果呈现了乙酰肝素酶浓度与酶促反应时间对底物降解的影响。基于酶剂量 - 响应线性关系、酶消耗情况及孵育时间结果，确定抑制剂筛选条件为 90 ng/mL 乙酰肝素酶、37℃孵育 30 分钟。（标注：HTRF Biotin-Heparan sulfate-Eu cryptate reagent 3.svg，对应 “乙酰肝素酶酶促动力学验证图”）

苏拉明抑制效应验证

以 20 μL 最终反应体积，用不同浓度酶进行乙酰肝素酶检测；随后以 90 ng/mL 乙酰肝素酶，在室温下与不同浓度苏拉明共同孵育 30 分钟，开展抑制实验。图 A 为乙酰肝素酶检测标准曲线，检测变异系数（CV）低于 3%；图 B 为已知乙酰肝素酶抑制剂苏拉明的抑制效应，计算得出半数抑制浓度（IC50）为 4 μM，与放射性检测方法得出的 1-10 μM 范围一致，验证检测可靠性。（标注：HTRF Biotin-Heparan sulfate-Eu cryptate reagent 4.svg、HTRF Biotin-Heparan sulfate-Eu cryptate reagent 5.svg，对应 “乙酰肝素酶检测标准曲线及苏拉明抑制效应图”）

产品规格

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用检测
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF
• 产品类别：荧光试剂
• 运输条件：干冰运输
• 靶标类别：结合检测
• 技术平台：TR-FRET
• 单位规格：20,000 次检测