HTRF MAB ANTI DNP-EU - 5K PTS

产品概述

抗 DNP 单克隆抗体为针对 DNP-BSA（二硝基苯 - 牛血清白蛋白）制备的 IgG1 型抗体，经铕（Eu）标记后形成抗 DNP-Eu cryptate 试剂。该抗体对 DNP - 氨基己酸及其他 DNP 衍生物均表现出高亲和力，可应用于生化和细胞两种实验体系，广泛研究蛋白 / 蛋白、蛋白 / 多肽、蛋白 / DNA、蛋白 / RNA、蛋白 / 碳水化合物、蛋白 / 小分子、受体 / 配体等多种分子间的相互作用。依托 HTRF 技术，该试剂能够检测解离常数（Kd）范围从皮摩尔到低毫摩尔的各类亲和力相互作用。

工作原理

检测原理

在 HTRF 相互作用检测体系中，两个相互作用的目标伴侣需分别通过直接或间接的方式标记供体与受体，信号强度与两个伴侣的结合程度呈正相关。具体示例流程为：抗 DNP-Eu cryptate 特异性结合 DNP 标记的结合伴侣 A，结合伴侣 B 则与标记 HTRF 受体的特异性抗体相结合。若结合伴侣 B 经过生物素化、标签标记或 Fc 融合修饰，可选用抗标签、抗种属、蛋白 A、链霉亲和素等对应的 HTRF 试剂标记受体完成检测。（标注：HTRF MAb Anti DNP-Eu cryptate 1.svg，对应 “抗 DNP-Eu cryptate 检测原理示意图”）

检测流程

以 20 微升最终反应体积，检测 DNP 标记的结合伴侣 A 与非标记结合伴侣 B 的相互作用为例，具体操作步骤如下：首先加入 10 微升两种结合伴侣的混合液，完成孵育后加入 5 微升抗 DNP-Eu cryptate 试剂和 5 微升标记受体的抗结合伴侣 B 抗体，再次孵育后读取荧光信号即可。若结合伴侣 B 为生物素化、标签标记、Fc 融合修饰或直接标记类型，更换对应标记受体的 HTRF 试剂即可适配检测。（标注：HTRF MAb Anti DNP-Eu cryptate 2.svg，对应 “抗 DNP-Eu cryptate 检测流程示意图”）

检测详情

检测次数与活性部分的关联

每孔中偶联物的平均量能反映出体系内生物材料的总体含量，在实验计量时，优先参考活性部分的含量而非偶联物总含量。对于铕穴状化合物和 d2 类偶联物，因标记物分子量极小可忽略不计，偶联物总含量与活性部分含量相等；但 XL665 标记的偶联物不同，其总含量会受 XL665 偶联物最终摩尔比的影响而波动。不过 Cisbio 提供的该试剂，其活性部分含量始终保持恒定，且该含量是依据订购的检测次数精准设定的。

适配浓度建议

搭配使用的铕穴状化合物偶联物浓度需严格把控，避免用量过多造成读数仪饱和，同时防止背景信号过高干扰实验结果。通常情况下，1-5 纳摩尔的铕穴状化合物浓度为适宜范围，该浓度在兼容 HTRF 的读数仪上，620 纳米波长下可产生 20,000-80,000 计数 / 秒的信号。XL665 偶联物浓度需尽量与检测体系中的对应目标物浓度匹配，这样才能让更多生物分子被 XL665 受体标记；比如检测 20 纳摩尔浓度的标记分子时，抗标签 - XL665 的浓度需达到与之等摩尔或更高水平。

产品规格

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用及多种分子间相互作用研究
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF
• 产品类别：荧光试剂
• 运输条件：常温运输
• 靶标类别：结合检测
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：心血管疾病、感染性疾病、炎症、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
• 单位规格：5,000 次检测