HTRF MAB ANTI 6HIS-EU - 5K PTS 6组氨酸K测量试剂-5,000测试

产品概述

该产品是针对多聚组氨酸标签融合蛋白制备的 IgG2a 型单克隆抗体，经铕（Eu）标记后形成抗 6HIS-Eu cryptate 试剂。其具备高特异性，可识别人工合成多聚组氨酸或多聚组氨酸标签融合蛋白，适配生化与细胞两种实验体系，广泛用于研究蛋白 / 蛋白、蛋白 / 多肽、蛋白 / DNA、蛋白 / RNA、蛋白 / 碳水化合物、蛋白 / 小分子、受体 / 配体等多种分子间的相互作用。依托 HTRF 技术，该试剂检测范围覆盖广，可检测解离常数从皮摩尔到低毫摩尔级别的各类亲和力相互作用，满足不同强度分子作用的研究需求。

工作原理

检测原理

在 HTRF 相互作用检测体系中，参与相互作用的两个分子伴侣需分别通过直接或间接的方式标记信号供体与受体，检测信号强度与两个伴侣的结合程度呈正相关。具体应用场景中，抗 6HIS-Eu cryptate 会特异性结合带有 6 组氨酸（6 His）标签的分子伴侣 A，分子伴侣 B 则与标记了 HTRF 受体的特异性抗体相结合。若分子伴侣 B 经过生物素化、标签标记或 Fc 融合修饰，可选用抗标签、抗种属、蛋白 A、链霉亲和素等对应的 HTRF 受体标记试剂完成检测。（标注：HTRF MAb Anti 6HIS-Eu cryptate 1.svg，对应 “抗 6HIS-Eu cryptate 检测原理示意图”）

检测流程

以 20 微升最终反应体积，检测 6 组氨酸标签的分子伴侣 A 与非标记分子伴侣 B 的相互作用为例，具体操作步骤如下：

1. 加入 10 微升两种分子伴侣的混合液并完成孵育；
2. 加入 5 微升抗 6HIS-Eu cryptate 试剂和 5 微升标记受体的抗分子伴侣 B 抗体；
3. 再次孵育后读取荧光信号即可。若分子伴侣 B 为生物素化、标签标记、Fc 融合修饰或直接标记类型，替换为对应的受体标记 HTRF 试剂即可适配检测。（标注：HTRF MAb Anti 6HIS-Eu cryptate 2.svg，对应 “抗 6HIS-Eu cryptate 检测流程示意图”）

检测详情

检测次数与活性部分的关联

每孔中偶联物的平均含量可反映体系内生物材料的总体含量，实验计量时建议优先参考活性部分的含量，而非偶联物总含量。

• 对于铕 / 铽穴状化合物和 d2 类偶联物，由于标记物分子量极小可忽略不计，偶联物总含量与活性部分含量完全一致；
• 对于 XL665 标记的偶联物，其总含量会随 XL665 偶联物的最终摩尔比变化而波动；
• 该试剂的活性部分含量由 Revvity 精准设定，始终保持恒定，且含量与订购的检测次数直接挂钩。（标注：HTRF MAb Anti 6HIS-Eu cryptate 3.svg，对应 “活性部分含量与检测次数关联说明图”）

试剂适配浓度建议

1. 铕穴状化合物偶联物：浓度需严格把控，避免用量过高导致读数仪信号饱和，同时防止背景信号过高干扰实验结果。多数情况下，1-5 纳摩尔的浓度最为适宜，该浓度在兼容 HTRF 的读数仪上，620 纳米波长下可产生 20,000-80,000 计数 / 秒的信号。
2. XL665 偶联物：浓度需尽可能与检测体系中对应的目标物浓度匹配，以保证更多生物分子被 XL665 受体标记。例如，当检测体系中标记分子浓度为 20 纳摩尔时，抗标签 - XL665 的浓度需达到与之等摩尔及以上水平，才能保障检测效果。

检测验证

该试剂的有效性经过多个蛋白相互作用模型验证，核心验证结果如下：

1. BRD4 (1)-H4 肽段相互作用检测以 6His 标签的 BRD4 (1) 阅读器结构域和生物素化 H4 肽段为研究对象，采用抗 6His 穴状化合物标记抗体与链霉亲和素 - XL665 的混合试剂进行检测。验证结果显示，该试剂可有效检测二者相互作用，且抗 6His Gold 系列试剂的检测窗口优于常规试剂及竞品 Lanthascreen 抗 His 标签抗体。通过肽段滴定实验确定最优浓度后，测得 JQ1 抑制剂对该相互作用的 IC₅₀值在 12–24.5 nM 之间，与文献报道数据一致。（标注：HTRF MAb Anti 6HIS-Eu cryptate 4.svg/5.svg/6.svg，对应相关实验验证图）
2. NEFcore/Hck (SH3 结构域) 蛋白相互作用检测NEFcore 与 Hck (SH3) 的相互作用是 HIV 感染性疾病的重要研究靶点。实验采用抗 GST-d2 抗体检测 GST 标签的 NEFcore，采用抗 6His 穴状化合物试剂检测 6His 标签的 Hck (SH3)。验证结果显示，抗 6His Gold 系列试剂相比常规抗 6His Eu/Tb 穴状化合物试剂，检测窗口显著提升，且优于竞品 Lanthascreen 抗 His 标签抗体；使用 FynSH3 蛋白作为抑制剂时，测得其 IC₅₀值在 0.7–2 μM 之间，抗 6His Tb 穴状化合物试剂的检测窗口表现略优。（标注：HTRF MAb Anti 6HIS-Eu cryptate 7.svg/8.svg/9.svg，对应相关实验验证图）
3. 不同标记抗体的性能对比实验对比了 Revvity 旗下抗 6His Eu/Tb/Eu Gold/Tb Gold 试剂与竞品 Lanthascreen 抗 His Eu/Tb 试剂的性能，发现抗体性能会随靶标蛋白的标签位置、相互作用类型不同而存在差异，需根据具体研究对象选择适配试剂；且在所有测试模型中，Revvity 抗 6His Gold 系列试剂的综合性能均优于竞品。

产品规格

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用及多种分子间相互作用研究
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF
• 产品类别：荧光试剂
• 运输条件：常温运输
• 靶标类别：结合检测
• 技术平台：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
• 适用治疗领域：心血管疾病、感染性疾病、炎症、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
• 单位规格：5,000 次检测