品牌: Revvity
该产品的活性成分源自山羊抗兔免疫血清,其中的免疫球蛋白 G(IgG)经免疫纯化工艺精准处理后,标记 XL665 荧光基团,形成高特异性荧光检测试剂 —— 多克隆抗体抗兔 IgG-XL665(PAb Anti Rabbit IgG-XL665)。其核心功能是精准捕获未标记的兔特异性抗体与靶分子、免疫球蛋白融合蛋白之间的结合反应,为兔源分子相互作用研究提供适配小规模实验的高可靠工具。该试剂具备双向实验体系兼容性,可同时应用于生化与细胞实验场景,能广泛支撑蛋白 / 蛋白、蛋白 / 多肽、蛋白 / DNA、蛋白 / RNA、蛋白 / 碳水化合物、蛋白 / 小分子及受体 / 配体等多种分子相互作用的研究。依托 HTRF 技术的核心优势,其可检测的亲和力常数范围覆盖皮摩尔(picomolar)至低毫摩尔(low millimolar)级别,灵活适配不同强度的分子相互作用分析,满足基础生物学预实验验证、小规模样本筛选、科研方法学建立等多样化需求。
在 HTRF 相互作用检测体系中,参与相互作用的两种分子需分别通过直接或间接方式标记供体荧光团与受体荧光团,检测产生的信号强度与两者的结合程度呈正相关。本试剂的典型应用逻辑为:多克隆抗体抗兔 IgG-XL665 与带兔 Fc 融合标签的分子 A 特异性结合,而分子 B * 则与标记 HTRF 供体的特异性抗体形成结合对。若分子 B 经过生物素化、带标签、Fc 融合等修饰,可灵活选用抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素等对应的 HTRF 供体标记试剂完成检测,确保实验设计的适配性与灵活性。(标注:HTRF PAb Anti Rabbit IgG-XL665 1.svg 对应 “抗兔 IgG-XL665 HTRF 检测原理示意图”)
以下为终反应体积 20 µL 的标准检测流程,适用于检测带兔 Fc 融合标签的分子 A 与非标记分子 B * 的相互作用,具体步骤如下:
若分子 B 经过生物素化、带标签、Fc 融合修饰或直接标记,需替换为对应的 HTRF 供体标记试剂(如抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素等)进行检测,确保不同实验设计场景下的检测准确性。(标注:HTRF PAb Anti Rabbit IgG-XL665 2.svg 对应 “抗兔 IgG-XL665 HTRF 检测流程示意图”)
试剂按检测次数(20 µL 反应体系 / 次)销售,XL665 或 d2 标记抗体的标准用量为每孔 20 ng 抗体。每瓶试剂会明确标注活性成分含量及标记物数量(活性成分为偶联物的功能活性核心部分,如抗体),1,000 次检测规格的活性成分为 20 µg(基于 5,000 次检测规格 XL665 偶联物活性成分为 100 µg 换算得出),抗体种属特异性为山羊抗兔免疫球蛋白(Rabbit Igs)。
每孔偶联物的平均用量反映总生物材料负载量,实际实验设计中优先参考活性成分含量(而非总偶联物质量)更具科学性。对于铕穴状化合物(Cryptate)和 d2 标记偶联物,由于标记物分子量极小可忽略不计,总偶联物量与活性成分量基本一致;而 XL665 标记偶联物的总偶联物量会因 XL665 与抗体的最终摩尔偶联比不同而变化,但 Revvity 提供的活性成分量恒定,且严格匹配订购的检测次数(1,000 次检测规格),确保小规模实验的结果重复性与数据可靠性。(标注:HTRF PAb Anti Rabbit IgG-XL665 3.svg 对应 “检测次数与活性成分关联说明图”)