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HTRF LYSIS & DETECT. BUF. 1 - 13 ML 环腺苷酸测试裂解液1-13毫升

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品牌： Revvity

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概述


针对 cAMP Gs dynamic 和 cAMP Gs HiRange 试剂盒优化并验证的裂解试剂。


规格


其他规格
应用
第二信使检测
品牌
HTRF
检测方式
HTRF
产品类别
缓冲液
运输条件
常温运输
靶标类别
G 蛋白偶联受体（GPCR）
技术
时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域
心血管
传染病
代谢 / 糖尿病
非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化
神经科学
肿瘤与炎症
罕见病
单位规格
13 毫升


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货号：62CL1FDD
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assay-validation-plc-gamma2-total-2（图示：总 PLCγ2 检测验证 2）

总 PLCγ2 HTRF 检测与蛋白质印迹法的比较

将人 B 细胞淋巴瘤 Ramos 细胞系在含完全培养基的 T175 培养瓶中，于 37°C、5% 二氧化碳条件下培养 48 小时。离心后，用 20 微克 / 毫升的抗人 IgM 抗体刺激细胞沉淀 5 分钟。随后加入 4 号裂解缓冲液（2 倍浓度），在室温下轻柔振荡裂解 30 分钟。


用补充后的裂解缓冲液对细胞裂解液进行系列稀释，取 16 微升各稀释度裂解液转移至小体积白色微孔板，再加入 4 微升总 PLCγ2 HTRF 检测试剂。取等量裂解液，通过蛋白质印迹法与 HTRF 法进行平行对比检测。


结果显示，使用总 PLCγ2 HTRF 检测时，每孔仅需 1000 个细胞即可检测到显著信号；而采用蛋白质印迹法时，需 2000 个细胞才能获得最低化学发光信号。因此，在此实验条件下，磷酸化 PLCγ2 HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的两倍。


assay-validation-plc-gamma2-total-3（图示：总 PLCγ2 检测验证 3）


简化通路

PLCγ2 信号通路简化图

PLCγ2（磷脂酶 Cγ2）是一种胞质酪氨酸激酶，在信号转导中发挥关键作用，尤其在免疫细胞（如 B 细胞和小胶质细胞 —— 脑内常驻巨噬细胞）中。


当 B 细胞或 TREM2/DAP12 受体复合物受到刺激时，PLCγ2 会与 SYK、BTK 和 BLNK（也称为 SLP-65）相互作用，通过其催化结构域的 Tyr1217 位点磷酸化而被激活。随后，PLCγ2 会将磷脂酰肌醇 4,5 - 二磷酸（PIP2）裂解为二酰甘油（DAG）和肌醇 1,4,5 - 三磷酸（IP3）。IP3 进而会促进钙释放，并将自身降解为肌醇 1 - 磷酸（IP1）。


这一过程会触发多种信号通路的激活和细胞反应，包括细胞激活、增殖和存活。


phospho-pathway-plcgamma2-total-kit-64plcg2tpeg（图示：PLCγ2 信号通路简化图）


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