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HTRF PT8-HALOTAG (ZEOCIN) 10 ?G

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概述

过去几年中，SNAP-Tag 技术与时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）相结合，为许多非放射性、无需洗涤的结合测定法的发展铺平了道路。该方法基于使用编码 SNAP-Tag 的质粒转染细胞，随后用铽对其进行标记。PT8HALOZEO 是一种载体骨架，包含 HALO 标签基因、一个启动子、一个博来霉素抗性基因和多克隆位点（MCS）。

工作原理
步骤 1 - 质粒构建
使用标准克隆技术，将目标 G 蛋白偶联受体（GPCR）基因插入空质粒中。请记住，在设计质粒时，GPCR 基因应保持正确的读码框。

步骤 2 - 质粒转染
使用标准转染技术（参见瞬时转染方案）在您的细胞系中瞬时表达目标 SNAP-GPCR。

步骤 3 - 受体标记
SNAP-tag® 是一种小型融合标签，可与特定底物发生共价相互作用。SNAP-tag 能够对任何目标蛋白质进行特异性共价标记。所提供的细胞未经过标记，在进行结合测定前需用 Lumi4 - 铽进行标记。标记试剂有 4 种不同规格，可从 Revvity 产品目录中获取。更多详情请参见标记步骤。

步骤 4 - 了解测定原理
使用 Tag-lite 进行受体结合测定非常简便。只需向每个孔中加入 10 微升标记细胞，随后加入 5 微升标记配体和 5 微升待测试化合物即可。与所有 HTRF 测定一样，Tag-lite 测定无需任何洗涤步骤。右侧给出了需遵循的操作流程示意图。

步骤 5 - 饱和结合（KD）
饱和结合测定用于在平衡条件下，针对浓度不断增加的配体，测量总结合和非特异性结合。进行该测定时，将荧光配体滴定到含有固定量标记细胞的溶液中，然后孵育至平衡。通过这种滴定获得的 HTRF 比值即为总结合。

步骤 6 - 竞争性结合（KI）
竞争性结合测定用于测量解离常数（Ki）。进行该测定时，将化合物滴定到含有固定浓度荧光配体和固定量细胞的溶液中。

规格

其他规格
应用
受体 - 配体结合
品牌
Tag-lite
检测方式
HTRF
产品类别
质粒
运输条件
干冰运输
靶标类别
G 蛋白偶联受体（GPCR）
技术
时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域
心血管疾病
传染病
代谢 / 糖尿病
非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化
神经科学
肿瘤与炎症
罕见病
单位规格
10 毫克

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