概述
抗 c-myc-d2 单克隆抗体为免疫球蛋白 G1 型抗体，以经 d2 标记、对应人源 c-myc 蛋白 408-439 位氨基酸序列的合成肽为抗原制备而成。该抗体可识别 EQKLISEEDL 基序，且对人源 c-myc 蛋白具有特异性；仅在抗体高浓度条件下，观察到其与鼠源 c-myc 蛋白存在轻微交叉反应。
本试剂可应用于生化和细胞实验体系，适用于研究多种分子间相互作用，包括：蛋白 - 蛋白、蛋白 - 多肽、蛋白 - DNA、受体 - 配体相互作用。
均相时间分辨荧光技术（HTRF）可检测的亲和常数范围极广，覆盖皮摩尔至低毫摩尔级别。
相较于其他技术，均相时间分辨荧光检测法具备多项优势：
工作原理
检测原理
在均相时间分辨荧光相互作用检测实验中，将供体标记物直接或间接标记于其中一种作用分子，另一种作用分子则直接或间接标记受体标记物。检测信号的强度与两种分子的结合程度呈正相关。本产品的检测示例如下：抗 c-myc-d2 单克隆抗体与带 c-myc 标签的作用分子 A 结合，同时作用分子 B * 与经均相时间分辨荧光供体标记物标记的特异性抗体相结合。
* 作用分子 B 也可进行生物素化、加标签、Fc 段融合改造，此类情况下，可使用经供体标记物标记的对应均相时间分辨荧光试剂（抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素）完成检测。
均相时间分辨荧光抗 c-myc-d2 单克隆抗体示意图 1
检测操作流程
右侧示例为终体积 20 微升的检测操作流程，适用于检测带 c-myc 标签的作用分子 A 与无标签的作用分子 B * 之间的相互作用。操作步骤：加入两种作用分子（共 10 微升），孵育；加入抗 c-myc-d2 单克隆抗体（5 微升）及经供体标记物标记的抗作用分子 B 抗体（5 微升），孵育后读取检测信号。
裂解完成后，将 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，再加入 4 微升 HTRF TDP-43 磷酸化或总 TDP-43 检测抗体。在室温下孵育过夜后，记录 HTRF 信号。
结果与预期一致：花萼海绵诱癌素 A 通过抑制 PP1/2，以剂量依赖的方式诱导 Ser409/410 位点磷酸化 TDP-43 的积累，而该处理对 TDP-43 蛋白的表达水平无调控作用。
（标注：Assay validation total tdp，即 “花萼海绵诱癌素 A 调控 TDP-43 磷酸化及总 TDP-43 检测结果图”）
将 Neuro2a 细胞接种到 96 孔板中（每孔 50,000 个细胞），培养 24 小时后，先用 CK1 抑制剂 IC 261 或 PF 670462（浓度均为 100 微摩尔 / 升）处理 1.5 小时，再用花萼海绵诱癌素 A（浓度 100 纳摩尔 / 升）激活 30 分钟。
细胞裂解后，将 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4 微升 HTRF TDP-43 磷酸化或总 TDP-43 检测抗体。孵育过夜后，记录 HTRF 信号。
结果与预期一致：经 CK1 抑制剂处理后，花萼海绵诱癌素 A 诱导的 TDP-43 Ser409/410 位点磷酸化被抑制，而该处理对 TDP-43 蛋白的表达水平无调控作用。
（标注：Assay validation total tdp inhibitor，即 “CK1 抑制剂调控 TDP-43 磷酸化及总 TDP-43 检测结果图”）
将贴壁生长的人源和鼠源细胞（Neuro2A 细胞、HeLa 细胞、SH-SY5Y 细胞）以每孔 50,000 个细胞的密度接种到 96 孔微孔板中。孵育 24 小时后，加入 50 微升补充型 1 号裂解缓冲液（1 倍浓度），在室温下轻柔振荡裂解细胞 30 分钟。
裂解完成后，将 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，再加入 4 微升 HTRF 总 TDP-43 检测试剂。孵育过夜后，记录 HTRF 信号。
结果显示：HTRF 总 TDP-43 检测可在多种人源和鼠源细胞模型中有效检测到总 TDP-43，且不同细胞系的总 TDP-43 表达水平存在差异。
（标注：Assay versatility，即 “不同细胞系中总 TDP-43 检测结果图”）
将 HeLa 细胞接种到 T175 培养瓶中，用完全培养基在 37°C、5% 二氧化碳条件下培养。孵育 48 小时后，用花萼海绵诱癌素 A（浓度 100 纳摩尔 / 升）处理细胞 30 分钟，随后加入 3 毫升补充型 1 号裂解缓冲液（1 倍浓度），在室温下轻柔振荡裂解细胞 30 分钟。
用补充型裂解缓冲液对细胞裂解液进行系列稀释，将 16 微升各稀释度的裂解液转移至小体积白色微孔板中，再加入 4 微升 HTRF 总 TDP-43 检测试剂。取等量裂解液进行 HTRF 检测与蛋白质印迹法的平行对比。
结果显示：使用 HTRF 总 TDP-43 检测时，每孔仅需 1,000 个细胞即可检测到显著信号；而使用蛋白质印迹法时，需 4,000 个细胞才能检测到最低化学发光信号。因此，在此实验条件下，HTRF 总 TDP-43 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 4 倍。
（标注：Assay validation total tdp wb comparison，即 “HTRF 与 Western Blot 检测总 TDP-43 对比结果图”）
TDP-43 是一种 DNA 和 RNA 结合蛋白，在 RNA 代谢中发挥关键作用。它主要定位于细胞核内，同时也会在细胞核与细胞质之间穿梭。
TDP-43 的磷酸化受到调控，尽管在病理状态下其磷酸化过程可能出现异常。已知多种激酶可促进 TDP-43 的磷酸化，包括酪蛋白激酶、Tau 微管蛋白激酶以及细胞分裂周期蛋白 7；而磷酸酶和钙调磷酸酶则可催化 TDP-43 的去磷酸化。基因突变、氧化应激等因素导致的上述调控过程异常，可能会使 TDP-43 磷酸化水平升高。TDP-43 的磷酸化会影响其细胞功能（如 RNA 结合或选择性剪接），还可能导致其定位异常并在细胞质中积累，进而引发聚集体形成。
