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HTRF STING P-S366 KIT - 10K PTS 磷酸化STING(S366)检测试剂盒 - 10,000测试

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概述

这款基于细胞的 HTRF 检测（磷酸化 STING Ser366 检测）可便捷且精准地定量 Ser366 位点磷酸化的 STING 蛋白，是研究 STING 通路活性的核心工具。其生物学背景如下：当病原体感染发生时，胞质中的双链 DNA（dsDNA）会与 DNA 传感器 cGAS（环磷酸鸟苷 - 腺苷合成酶）结合；激活后的 cGAS 进一步促使 STING 蛋白被 TBK1 激酶磷酸化；磷酸化的 STING 能与 IRF3（干扰素调节因子 3）结合，最终诱导 I 型干扰素（IFNs）的产生，启动先天免疫反应。而 STING 通路的关闭则依赖于自噬介导的 STING 蛋白降解过程，形成通路的负反馈调节。

在肿瘤免疫领域，激活 STING 通路已在临床前模型中展现出显著的抗肿瘤潜力 —— 通过激活机体先天免疫应答，增强对肿瘤细胞的杀伤作用，因此该通路成为开发癌症治疗方案的重要靶点，相关检测技术也为药物研发提供关键支持。

工作原理

磷酸化 STING（Ser366）检测原理

该检测通过特异性抗体与荧光共振能量转移（FRET）技术，实现对 Ser366 位点磷酸化 STING 的定量分析，核心优势在于无需凝胶、电泳或转膜，全程为板基操作，流程高效且结果稳定。

具体机制如下：

双抗体设计：检测体系包含两种标记抗体 —— 一种偶联供体荧光团，仅特异性结合 STING 蛋白上 Ser366 磷酸化的基序（仅识别磷酸化 STING）；另一种偶联受体荧光团，可不依赖磷酸化状态，普遍识别 STING 蛋白本身（识别总 STING）。
免疫复合物与 FRET 信号：当样本中存在磷酸化 STING 时，两种抗体可同时结合于同一 STING 分子，形成 “供体 - 受体” 荧光团近距离接触的免疫复合物；此时供体荧光团被激发后，能量会转移至受体荧光团，产生 FRET 信号。
定量关系与检测模式：FRET 信号的强度与样本中磷酸化 STING 的浓度呈直接正相关，可通过信号值计算磷酸化蛋白水平；且检测采用 “免洗涤” 模式，无需额外清洗步骤，大幅减少操作误差与时间成本。

（标注：Phospho how it works phospho sting，即 “磷酸化 STING（Ser366）检测原理示意图”）

磷酸化 STING（Ser366）双板检测方案

双板方案适用于需同步监测细胞状态的场景，操作流程分三步：

细胞培养与处理：在 96 孔板中完成细胞培养（如 THP1-R232 细胞）、通路刺激（如 2’-3’ cGAMP 处理）与裂解。
样本转移：将裂解后的细胞样本转移至小体积检测板（可选 HTRF 384 孔小体积板或 96 孔小体积板），适配微量样本检测需求。
信号检测：加入磷酸化 STING（Ser366）HTRF 检测试剂，孵育后读取信号。

该方案的核心优势是可同步监测细胞活力与汇合度，能排除细胞存活状态差异对通路激活检测结果的干扰，确保数据可靠性（例如判断磷酸化信号变化是通路激活导致，而非细胞数量减少）。

（标注：Sting plate assay protocol，即 “磷酸化 STING（Ser366）双板检测方案流程示意图”）

磷酸化 STING（Ser366）单板检测方案

单板方案专为高通量筛选（HTS）设计，全程在同一培养板中完成：

一体化操作：在单块 96 孔或 384 孔板中依次完成细胞接种、培养、通路刺激（如药物处理）与裂解，无需跨板转移样本。
免洗涤检测：直接在板中加入检测试剂，孵育后读取信号，无洗涤步骤。

该方案的优势在于微型化与高效性：既能节省样本与试剂用量（适配小体积反应体系），又能减少操作步骤与交叉污染风险，同时保持 HTRF 技术的高稳定性，可满足大规模药物筛选（如 STING 激动剂筛选）或批量样本分析的需求。

（标注：Sting plate assay protocol，即 “磷酸化 STING（Ser366）单板检测方案流程示意图”）

检测验证

通过三类核心实验验证了检测的特异性、准确性与灵敏度，确保其适用于 STING 通路研究场景：

1. 2’-3’ cGAMP 诱导 THP1 细胞 STING 磷酸化 —— 验证通路响应特异性

实验设计：

将人 THP1-R232 细胞（STING 通路敏感细胞系，购自 Invivogen）以 4×10⁵个细胞 / 孔、25μL 体系接种到 96 孔板；用浓度递增的 2’-3’ cGAMP（STING 通路特异性激动剂，5μL 体系）刺激细胞 4 小时；随后加入 10μL 4× 浓度的 4 号补充型裂解缓冲液，室温轻柔振荡裂解 30 分钟。

取 16μL 裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，加入 4μL HTRF 磷酸化 STING / 总 STING 检测抗体；同时取 4μL 裂解液用 HTRF α- 微管蛋白（内参）试剂盒检测，排除样本量差异干扰；室温孵育过夜后读取信号。

结果与结论：

2’-3’ cGAMP 可显著激活 STING 通路，使 Ser366 位点磷酸化水平提升6 倍，与已知通路激活机制完全一致；
伴随磷酸化水平升高，STING 总蛋白表达下调（符合自噬介导的 STING 降解负反馈机制）；
α- 微管蛋白表达稳定，证明磷酸化信号变化并非样本量差异导致。
该实验验证了检测对 STING 通路激活的特异性响应能力。

（标注：Assay validation sting phospho，即 “2’-3’ cGAMP 诱导 THP1 细胞 STING 磷酸化的检测结果图”）

2. HTRF 与 Western Blot 平行定量 —— 验证检测准确性

实验设计：

延续上述 THP1-R232 细胞模型，用浓度递增的 2’-3’ cGAMP 刺激后裂解细胞；取 16μL 裂解液分别通过 HTRF 检测与 Western Blot（ECL 化学发光）检测，对�