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HTRF ERK TOTAL KIT - 10K PTS ERK总蛋白检测试剂盒 - 10,000测试

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概述

总 ERK1/2 检测试剂盒是配合磷酸化 ERK 检测试剂盒进行 ERK 归一化检测的理想选择。该试剂盒与磷酸化 ERK 检测试剂盒或高级磷酸化 ERK 检测试剂盒中的缓冲液兼容，因此同一份细胞裂解液可用于快速便捷地分析总蛋白与磷酸化蛋白群体。

工作原理

总 ERK 检测原理

总 ERK 检测可对细胞裂解液中 ERK（细胞外调节蛋白激酶）的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板开展，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 ERK 检测采用两种标记抗体：一种与供体荧光团偶联，另一种与受体荧光团偶联。两种抗体均对 ERK 蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 ERK 时，加入这些抗体偶联物会使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，进而产生 FRET（荧光共振能量转移）信号。该信号强度与样品中 ERK 蛋白的浓度呈直接正相关，且可通过 “免洗涤” 检测模式评估该蛋白的表达水平。

（标注：phospho-how-it-works-total-erk-assay-principle）

总 ERK 双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行裂解；将裂解液转移至 384 孔低体积检测板后，再加入总 ERK HTRF（均相时间分辨荧光）检测试剂。该方案可实现对细胞活力和汇合度的监测。

（标注：phospho-how-it-works-total-erk-2-plate-assay-protocol）

总 ERK 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 ERK 时，可在同一块微孔板中完成细胞培养、刺激和裂解操作，无需洗涤步骤。该方案专为 HTS（高通量筛选）设计，既能实现实验微型化，又能保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

（标注：phospho-how-it-works-total-erk-1-plate-assay-protocol）

检测验证

总 ERK1/2 检测在多种细胞系中的验证

将人源细胞（Hela、A431、HEK293、Jurkat）、鼠源细胞（NIH 3T3）和仓鼠细胞（CHO-K1）在 T175 培养瓶中于 37°C、5% 二氧化碳条件下培养 2 天。移除细胞培养基后，加入 3mL 3 号补充裂解缓冲液，孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。取 16 微升细胞裂解液用于 ERK1/2 检测。尚未对其他物种的细胞系进行测试，因此需根据具体情况逐一评估。

（标注：assay-validation-erk-total-1）

总 ERK 检测用于监测 ERK1/2 的磷酸化状态

采用磷酸化 ERK1/2 检测和总 ERK1/2 检测的双板检测方案，用 EGF（表皮生长因子）激活 A431 细胞（每孔 100,000 个细胞），刺激时间为 10 分钟。正如预期结果所示，EGF 刺激可诱导 ERK1/2 磷酸化水平呈剂量依赖性升高，而 ERK1/2 的表达水平保持恒定。

（标注：assay-validation-erk-total-2）

简化通路

MAPK/ERK 细胞信号通路

MAPK/ERK（丝裂原活化蛋白激酶 / 细胞外调节蛋白激酶）信号级联可被多种参与生长和分化的受体激活。核心信号转导级联可调控多种细胞过程，包括细胞黏附、迁移、凋亡、分化和代谢。MEK1/2（丝裂原活化蛋白激酶激酶 1/2）可催化 ERK1/2 的酪氨酸 204（Tyr204）和苏氨酸 202（Thr202）位点磷酸化。相应地，ERK 会磷酸化数百种细胞质和细胞核底物。MAPK 信号通路的高度复杂性和多样性，使得 ERK 成为生物学中关键的调控因子和重要的信号节点。

（标注：phospho-pathway-mapk-erk-64nrkpeg）

GPCR 信号通路中的 ERK

ERK 的调控在 GPCR（G 蛋白偶联受体）信号通路中发挥重要作用，因此是 GPCR 信号通路中一个重要的可检测读数。GPCR 通过 G 蛋白发挥作用，调控多种细胞功能。受到刺激后，这些受体会激活腺苷酸环化酶、磷脂酶 C 等效应分子，这些分子不仅会影响环磷酸腺苷（cAMP）、钙离子（Ca²⁺）等第二信使的细胞内浓度，还会介导 ERK1/2 的磷酸化。研究表明，GPCR 也可通过不依赖 G 蛋白但依赖 β- 抑制蛋白的方式介导 ERK1/2 的激活。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
分子修饰类型：总蛋白
产品类别：试剂盒
样品体积：16 微升
运输条件：干冰运输
检测靶标：ERK1/2（细胞外调节蛋白激酶 1/2）
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术原理：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域：
- 代谢 / 糖尿病
- 非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化
- 神经科学
- 肿瘤学与炎症
- 罕见病
单位规格：10,000 个检测点

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货号：64NRKPEH

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