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HTRF EGFR P-PAN KIT - 500 PTS 磷酸化EGFR检测试剂盒 - 500测试

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品牌： Revvity

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概述

泛磷酸化 EGFR 检测旨在基于细胞对 EGFR 上所有酪氨酸磷酸化进行定量检测。导致 EGFR（也称为 ErbB1 或 HER1）过表达或过度激活的突变与多种癌症相关，如肺癌、结直肠癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤等。这使得 EGFR 成为抗癌治疗相关免疫检测的关键靶标。

工作原理

泛磷酸化 EGFR 检测原理

泛磷酸化 EGFR 检测用于测定发生泛磷酸化的 EGFR。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。泛磷酸化 EGFR 检测使用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质的磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且能在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质的磷酸化状态。

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泛磷酸化 EGFR 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入泛磷酸化 EGFR HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

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泛磷酸化 EGFR 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测泛磷酸化 EGFR 可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

EGF 对 A431 细胞的剂量反应实验

将人 A431 细胞（5,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的 EGF 刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用泛 EGFR 检测的单板检测方案测定磷酸化 EGFR 水平。

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EGFR 磷酸化抑制实验

将细胞接种到 96 孔板中并孵育 24 小时。用剂量梯度的抑制剂预处理后，再用 EGF 刺激细胞。细胞裂解后，将裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中进行检测，并加入 HTRF 泛磷酸化 EGFR 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。结果表明，HTRF 泛磷酸化 EGFR 检测可用于解析靶向 EGFR 的小分子药物和生物制剂的作用机制。

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EGFR 磷酸化抑制实验

用剂量梯度的厄洛替尼和拉帕替尼（两种小分子酪氨酸激酶抑制剂）预处理细胞。使用非抑制性化合物 PQ401 作为对照（左图 1）。用剂量梯度的西妥昔单抗（一种治疗性单克隆抗体）预处理细胞，使用非抑制性单克隆抗体对照（15441）作为对照（右图 2）。

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简化通路

EGFR（表皮生长因子受体）信号传导简化通路

EGFR 是一种受体酪氨酸激酶，属于 ErbB 家族。EGFR 配体的结合会驱动受体同源二聚化或异源二聚化，进而激活 EGFR 酪氨酸激酶结构域和特定酪氨酸残基。磷酸化的酪氨酸残基随后为多种因子提供停靠位点，这些因子会诱导多个信号转导级联反应的下游激活。从 EGF 受体传递至细胞核的信号会调控多种生物学功能，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。导致 EGFR 过表达或过度激活的突变与多种癌症相关，这使得 EGFR 成为抗癌治疗的关键靶标。

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规格

其他规格
应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：500 个检测点

没有数据

货号：64HR1PEG

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