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载脂蛋白(Apolipoproteins)是一类与脂质结合形成脂蛋白的蛋白质,核心功能是转运脂质。载脂蛋白对维持脂蛋白的结构完整性和溶解性至关重要,同时在脂蛋白受体识别、脂蛋白代谢中特定酶的调控过程中发挥关键作用。载脂蛋白 A1(ApoA1)是高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白成分,其缺乏与高密度脂蛋白缺乏症相关,包括系统性非神经病变性淀粉样变性。此外,ApoA1 可能还具有预防阿尔茨海默病的作用。
ApoA1 检测采用双抗夹心免疫分析法,涉及两种单克隆抗体:一种标记有铕 - 穴状化合物(Eu-Cryptate,供体),另一种标记有 d2(受体)。检测产生的信号强度与样本中载脂蛋白的浓度呈正比。(图示:1biomarkers-how-it-works-assay-principle-apoa1-64apapeg-64apapeh.svg,载脂蛋白 A1 检测原理相关图示)
ApoA1 检测采用简化流程:加入样本 / 校准品和抗体偶联物后,仅需一次孵育步骤即可完成。标记有均相时间分辨荧光(HTRF)供体和受体的抗体可预先混合,通过单次加样步骤加入,进一步简化检测流程。该方案需在室温(RT)下进行单次 3 小时的孵育。(图示:2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-apoa1-64apapeg-64apapeh.svg,载脂蛋白 A1 检测方案相关图示)
将融合度达 80%-90% 的人肝癌细胞(HepG2)接种于添加 2% 胎牛血清(FBS)的 DMEM 培养基(Gibco;货号 11885,低糖型)中培养。向 384 孔低体积黑色培养板中加入 5 微升 HepG2 细胞悬液(每孔 2000 个或 5000 个细胞),以及 5 微升不同浓度的 RXR 配体 9 - 顺式视黄酸(9-cis-RA)(溶于含 2% FBS 的 DMEM 培养基)。在 37°C、二氧化碳培养箱中孵育 48 小时后,加入 10 微升两种预混合的检测试剂。(图示:3assay-validation-human-apolipoprotein-a1-1.svg,载脂蛋白 A1 检测验证相关图示)