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ALPHALISA (HUMAN) NIDOGEN-1 KIT, 5000PTS

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将人 HepG2 细胞接种并在高糖培养基中培养，然后用肿瘤坏死因子 -α（TNF-α）/ 白细胞介素 - 1β（IL-1β）/ 白细胞介素 - 6（IL-6）混合物或过氧化氢（H₂O₂）处理。裂解后，将可溶性细胞裂解物多次转移至小体积白色微孔板中，最后加入 HTRF 磷酸化 FoxO1 或总 FoxO1 检测抗体。结果表明，促炎细胞因子和活性氧（ROS）通过诱导 HepG2 细胞系中 FoxO1 的去磷酸化（激活）来驱动代谢失调，而其表达水平保持稳定。

使用 PI3K 抑制剂渥曼青霉素（Wortmannin）激活胰腺 β 细胞中的 FoxO1

将小鼠胰腺 β 细胞系 Min-6 接种并在高糖培养基中培养 3 天，随后用浓度递增的渥曼青霉素处理 1 小时。裂解后，将细胞裂解物多次转移至小体积白色微孔板中，最后加入 HTRF 磷酸化 FoxO1 或总 FoxO1 检测抗体。结果显示，渥曼青霉素可抑制 PI3K/AKT 通路，导致 Min-6 细胞系中 FoxO1 去磷酸化（激活）。FoxO1 的表达水平保持稳定，表明该化合物对细胞无细胞毒性作用。

在宫颈癌 HeLa 细胞系中使用胰岛素样生长因子 - 1（IGF-1）失活 FoxO1

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人 HEK293 细胞中 HTRF 磷酸化及总 FoxO1 检测与蛋白质印迹法（WB）的比较

将 HEK293 细胞接种并在完全培养基中培养至汇合度达到 90%。裂解后，通过离心收集可溶性上清液。对细胞裂解物进行系列稀释，转移至小体积白色微孔板中，然后加入 HTRF 磷酸化或总检测抗体。使用等量的裂解物进行蛋白质印迹法与 HTRF 的平行比较。结果显示，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 2 倍。使用 HTRF 总 FoxO1 试剂盒时，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 8 倍。

简化通路

FoxO1 简化通路

胰岛素 / 胰岛素样生长因子 - 1（IGF-1）信号通路激活 AKT 激酶，进而使 FoxO1 在 Ser256 位点磷酸化，导致其在细胞质中滞留并抑制其转录活性。在这种情况下，肝糖原生成受到抑制，脂肪生成增加，细胞增殖。相反，去磷酸化形式的 FoxO1 可转移至细胞核，诱导参与糖生成、脂解、抑制脂肪生成、应激抵抗、凋亡、自噬和炎症的基因转录。在促炎细胞因子、氧化应激、禁食和运动等条件下，应激蛋白 JNK 和 p38 可激活 FoxO1。