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HTRF BDNF KIT - 500 PTS

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品牌： Revvity

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概述

脑源性神经营养因子（BDNF）是神经营养因子家族的成员之一，该家族还包括神经生长因子（NGF）以及神经营养因子 3 和 4（NT-3、NT-4）。

在健康或病变大脑相关研究中，BDNF 是研究最为广泛的神经营养因子之一。它由神经元和神经胶质细胞分泌，其表达受到多种内源性和外源性刺激（如压力、体力活动、脑损伤、饮食）的显著调控。BDNF 在调控神经元与神经胶质细胞发育、神经保护以及调节突触相互作用方面发挥关键作用，而这些过程对认知功能和记忆至关重要。

BDNF 水平降低与多种神经退行性疾病相关，例如帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化症和亨廷顿舞蹈症。

工作原理

BDNF 检测原理

BDNF 的检测采用夹心免疫分析法，该方法涉及两种特异性抗 BDNF 抗体，分别标记有均相时间分辨荧光（HTRF）供体染料和受体染料。检测信号的强度与样本中 BDNF 的浓度呈直接正相关。

（标注：biomarkers-how-it-works-assay-principle-bdnf-62bdnfpeg-62bdnfpeh，此为该检测原理对应的标识代码）

BDNF 检测方案

本检测方案需使用 384 孔小体积白色微孔板或瑞孚迪（Revvity）低体积 96 孔板（最终反应体积为 20 微升），具体操作步骤如下文所述。将 16 微升细胞上清液或标准品直接加入检测板中，随后使用 HTRF® 试剂进行检测。标记有 HTRF 供体染料和受体染料的抗体可预先混合，通过单次加样步骤加入反应体系，从而进一步简化检测流程。该检测可在 96 孔板至 384 孔板中进行，只需按比例调整各试剂的添加体积即可。

（标注：biomarkers-how-it-works-assay-protocol-bdnf-62bdnfpeg-62bdnfpeh，此为该检测方案对应的标识代码）

检测详情

BDNF 检测试剂盒技术规格

规格项目	具体参数
样本体积	16 微升
最终检测体积	20 微升
结果获取时间	室温下孵育过夜
试剂盒组成	冻干标准品、冷冻保存的检测抗体、缓冲液及检测说明书
检测限（LOD）与定量限（LOQ）（在稀释液中）	5 皮克 / 毫升（LOD）、31 皮克 / 毫升（LOQ）
检测范围	31–5000 皮克 / 毫升
校准公式	国家生物标准与控制研究所（NIBSC）单位值（国际单位 / 毫升）= 0.0012×HTRF BDNF 检测值（皮克 / 毫升）
适用物种	人、小鼠、大鼠、牛、猪、犬
特异性	不与 NGF、NT-3、NT-4 发生交叉识别

分析性能

BDNF 标准曲线

试剂盒中提供的重组 BDNF（标准品）按照试剂盒说明书中的操作步骤，在 5 号稀释液中进行系列稀释。以检测得到的 HTRF 信号（以差值比表示）为纵坐标，以所测试的 BDNF 浓度为横坐标绘制标准曲线。

（标注：analytical-performance-bdnf-1，此为该标准曲线对应的标识代码）

精密度

批内精密度（n=24）

样本编号	BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	变异系数（CV）
1	90	4%
2	2500	9%
3	4500	4%
-	平均变异系数	5.7%

注：每个样本均进行 24 次重复检测，并计算每个样本的变异系数（% CV）。

批间精密度（n=5）

样本编号	BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	变异系数（CV）
1	78	9%
2	312	7%
3	1250	4%
-	平均变异系数	6.7%

注：每个样本在 5 个不同实验中进行检测，并计算每个样本的变异系数（% CV）。

加标回收率

细胞上清液中 BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	加入的重组 BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	理论总 BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	实际测得总 BDNF 浓度（皮克 / 毫升）	回收率
21	124	145	147	101.4%
453	334	787	812	103.2%
1335	408	1743	1730	99.3%

检测验证

经 γ- 干扰素（IFN-γ）处理的人小胶质细胞系 HMC3

将人小胶质细胞系 HMC3 接种于 T75 培养瓶（3×10^6 个细胞），使用完全培养基培养至细胞融合度达到 80%。随后，一部分细胞用 10 纳克 / 毫升的人 γ- 干扰素处理 24 小时，另一部分细胞不进行处理（空白对照）。收集各组细胞的上清液，按照 HTRF 试剂盒说明书中的步骤检测 BDNF 的分泌水平。

结果显示，与文献报道一致，经 γ- 干扰素处理的小胶质细胞 BDNF 释放量显著降低。

（标注：Assay-validation-bdnf-1，此为该验证实验对应的标识代码）

经促炎细胞因子处理的人诱导多能干细胞（hiPSC）来源星形胶质细胞 Astro.4U

将人诱导多能干细胞来源的星形胶质细胞（Astro.4U®，购自 Ncardia 公司）接种于经多聚 - L - 鸟氨酸 / 层粘连蛋白包被的 96 孔板中，培养 7 天。随后，一部分细胞用混合促炎细胞因子（10 纳克 / 毫升肿瘤坏死因子 -α+100 纳克 / 毫升白细胞介素 - 1β+100 纳克 / 毫升 γ- 干扰素）处理 24 小时，另一部分细胞不进行处理（空白对照）。收集各组细胞的上清液，按照 HTRF 试剂盒说明书中的步骤检测 BDNF 的分泌水平。

结果符合预期：当星形胶质细胞暴露于上述混合促炎细胞因子时，其 BDNF 释放浓度显著升高。

（标注：assay-validation-bdnf-2，此为该验证实验对应的标识代码）

简化通路

BDNF 相关简化通路

星形胶质细胞对其所处微环境高度敏感，在中枢神经系统（CNS）受损时能快速做出反应。激活的信号通路会使星形胶质细胞呈现促炎或抗炎表型。

在某些细胞因子和生长因子的作用下，星形胶质细胞会激活 Jak/STAT3 信号通路。研究认为，该通路可调控多种神经营养因子和神经保护因子的上调与分泌，进而促进神经元存活和突触修复，BDNF 便是其中之一。

（标注：biomarkers-tab4-bdnf-simplified-pathway-62bdnfpeg-62bdnfpeh，此为该简化通路对应的标识代码）

规格参数

其他规格参数

规格类别	具体信息
应用领域	蛋白质定量
品牌	HTRF
检测方式	HTRF（均相时间分辨荧光）
产品类别	试剂盒
样本体积	16 微升
运输条件	干冰运输
靶标类别	生物标志物
技术平台	TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域	神经科学
单位规格	500 次检测用量

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货号：62BDNFPEG

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