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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Cytokines > HTRF HUMAN IFN G KIT - 500 PTS 人的干扰素gamma测量试剂盒-500测试

概述


IFN-γ 是一种促炎细胞因子,由 T 细胞和 NK 细胞在病毒感染或炎症条件下分泌。IFN-γ 在固有免疫和适应性免疫中起重要作用,可促进 T 细胞分化为 TH1 细胞和调节性 T 细胞(Treg),并抑制 T 细胞向 TH17 细胞分化。其抗肿瘤特性已用于治疗骨质疏松症,且在免疫肿瘤学领域备受关注,可改善膀胱癌或卵巢癌患者的生存率。


血清样本检测通常需要更高的灵敏度。在某些情况下,AlphaLISA 检测法可能具有足够的灵敏度,能够检测血清或血浆中低水平的分析物。


工作原理

检测原理

将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板,使用 HTRF® 试剂(384 孔低体积白色板或 Cisbio 低体积 96 孔板,20 µl 体系)进行检测。预先混合标记有 HTRF 供体和受体的抗体,并通过单次加样步骤加入,以进一步简化检测流程。该检测可通过按比例调整各加样体积,直接扩展至 1536 孔板格式。


IFN-γ 试剂盒检测原理

检测数据分析

推荐使用四参数逻辑(4PL)曲线拟合 ELISA 标准曲线。与线性分析相比,该回归模型可在更宽的浓度范围内准确测量未知样本,非常适合分析细胞因子释放等生物系统。


检测详情

人 IFN-γ 试剂盒技术规格

  • 样本体积:16 µL
  • 最终检测体积:20 µL
  • 试剂盒组分:冻干标准品、冻存检测抗体、缓冲液及实验方案
  • 检测限与定量限(在稀释液中):14 pg/mL & 21 pg/mL
  • 检测范围:21–4,000 pg/mL
  • 出结果时间:室温孵育过夜
  • 校准:NIBSC(82/587)值(IU/mL)= 0.019 × HTRF hIFN-γ 值(pg/mL)
  • 适用物种:仅限人类


分析性能

批内与批间差异

批内检测(n=24)


样本平均 [IFN-γ](pg/mL)变异系数(CV)
12099%
283511%
343677%
平均 CV9%


每个样本检测 24 次,计算各样本的 % CV。


批间检测(n=4)


样本[IFN-γ](pg/mL)平均(delta R)变异系数(CV)
19817814%
24327889%
3190531706%
平均 CV9.7%


每个样本在 4 次不同实验中检测,计算各样本的 % CV。


稀释线性

实验获得的优异回收率表明该检测具有良好的线性。


样本稀释倍数[IFN-γ] 预期值(pg/mL)[IFN-γ] 检测值(pg/mL)回收率
11-150-

2.172.66691%

4.3353086%

平均值88%

21-1953-

2.1942959102%

4.345445099%

平均值100%

加标回收率

样本[IFN-γ] 加入量(pg/mL)[IFN-γ] 预期值(pg/mL)[IFN-γ] 检测值(pg/mL)回收率
12,0002,4212,08686%
22,0003,3603,363100%


将相同量的重组细胞因子加入 2 种不同血清样本,将标准曲线得到的响应值与计算的预期值比较。观察到的回收率接近 100%,验证了该检测所用的样本基质。


检测验证

PMA 和离子霉素刺激 PBMC 的 IFN-γ 分泌

将 PBMC 以 50、100、200 和 400 kcells / 孔铺板,用逐渐增加浓度的 PMA(0、1、50 ng/mL)加入 500 ng/mL 离子霉素溶液中刺激 3 小时。然后将 16 µL 上清液转移至白色检测板(384 孔,低体积),使用人 IFN-γ 检测试剂盒进行分析。



其他规格

  • 应用:蛋白质定量
  • 品牌:HTRF
  • 检测方式:HTRF
  • 产品类别:试剂盒
  • 样本体积:16 µL
  • 运输条件:干冰运输
  • 靶标类别:细胞因子
  • 靶标物种:人类
  • 技术:TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
  • 治疗领域:肿瘤学与炎症
  • 单位规格:500 检测点


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