当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF IR BETA P-Y1150KIT - 500 PTS 磷酸化胰岛素受体蛋白检测试剂盒 - 500测试
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概述
磷酸胰岛素受体-β （Tyr1150/1151） 检测能够检测胰岛素受体-β 上的 Tyr1150/1151 磷酸化。在胰岛素和胰岛素样生长因子的刺激下，胰岛素受体参与多种途径，例如胰岛素和 FoxO 信号传导。
磷酸胰岛素受体-β （Ser177/181） 测定可测量胰岛素受体-β 在 Ser177/181 位点被磷酸化时的水平。与 Western Blot 相反，该检测完全基于板，不需要凝胶、电泳或转移。磷酸胰岛素受体-β （Ser177/181） 检测使用 2 种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体。选择第一种抗体是因为它与蛋白质上的磷酸化基序特异性结合，第二种抗体是因为它能够独立于其磷酸化状态识别蛋白质。蛋白质磷酸化能够形成涉及标记抗体的免疫复合物，并使供体荧光团靠近受体，从而产生 FRET 信号。其强度与样品中存在的磷酸化蛋白浓度成正比，并提供了一种在免洗检测形式下评估蛋白磷酸化状态的方法。 2 板方案包括裂解前在 96 孔板中培养细胞，然后将裂解物转移到 384 孔低体积检测板中，然后添加磷酸化 IR-β （Ser177/181） HTRF 检测试剂。该协议可以监测细胞的活力和汇合度。 使用 HTRF 试剂检测磷酸化 IR-β （Ser177/181） 可以在用于培养、刺激和裂解的单个板中进行。无需清洗步骤。这种 HTS 设计的方案可实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。 将 HepG2 细胞以每孔 100,000 个细胞的密度接种在 96 孔板上。在 37°C、5% CO2 下孵育过夜后，在 37°C、5% CO2 的条件下在细胞下加入胰岛素连续稀释液 5 分钟。从细胞中去除刺激培养基，并在细胞中加入 50 μL 裂解缓冲液。通过在 30 分钟内轻轻摇晃来完成裂解步骤。将 16 μL 样品转移到 384 孔小体积板中，然后加入 4 μL 磷酸化 IRβ HTRF 检测试剂。信号是在一夜之间记录下来的。 将 HepaRG 细胞以每孔 200,000 个细胞的密度接种在 96 孔板上。在 37°C、5% CO2 下孵育 5 天后，在 37°C、5% CO2 存在下，在 30μM 过钒酸盐存在下加入胰岛素梯度稀释液 5 分钟。从细胞中去除刺激培养基，并在细胞中加入 50 μL 裂解缓冲液。通过在 30 分钟内轻轻摇晃来完成裂解步骤。将 16 μL 样品转移到 384 孔小体积板中，然后加入 4 μL 磷酸化 IRβ HTRF 检测试剂。同时，将 16 μl 分装到其他孔上，而不是添加 4 μL 总 IRβ HTRF 检测试剂。信号是在一夜之间记录下来的。 将人 Hek 293 细胞培养至 80% 汇合度。胰岛素和高钒酸盐共处理后，裂解细胞并通过离心收集可溶性上清液。对细胞裂解物进行连续稀释，将每种稀释液的 16 μL 转移至 384 孔低容量白色微孔板中，最后加入磷酸化 IRβ HTRF 细胞试剂盒试剂。并排比较显示，HTRF 磷酸化检测的灵敏度至少是 Western Blot 的 8 倍。 规格
检测靶标类型 工具箱品牌 HTRF治疗领域 新陈代谢/糖尿病神经单位面积 50,000 个检测点运作方式
磷酸胰岛素受体 ß （Ser177/181） 检测原理
磷酸胰岛素受体 ß （Ser177/181） 2 板检测方案
磷酸胰岛素受体 ß （Ser177/181） 1 板检测方案
检测验证
HepG2 细胞上的 Phospho-IRβ （Tyr1150/1151） 图示
HepaRG 上的 Phospho-IRβ （Tyr1150/1151） 图示
Phospho-IRβ （Tyr1150/1151） WB 比较
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货号：63ADK016PEG
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