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ALPHA.SF ULTRA YAP PS397, 10K

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筛选的稳健性

在室温下，用卡巴胆碱刺激中国仓鼠卵巢细胞（CHO）-M1 细胞（每孔 5,000 个细胞，384 孔小体积板）10 分钟。计算未刺激细胞（基础水平）与两种选定的卡巴胆碱浓度（1.3 µM 和 4 µM，分别对应于 80% 最大效应浓度（EC80）和 100% 最大效应浓度（EC100））之间五十次重复实验的 Z' 值。使用磷酸化 ERK 检测试剂盒的单板检测方案，在 CyBio™公司的自动化机器人系统（配备 384/25 µL 移液头的 CyBivario）上进行检测。使用 PHERAStar Plus（BMG Labtech 公司）读取结果。

总 ERK1/2 检测以控制 ERK1/2 的磷酸化

使用磷酸化 ERK1/2 和总 ERK1/2 检测的双板检测方案，用 EGF 刺激人表皮癌细胞系 A431 细胞（每孔 100,000 个细胞）10 分钟。正如预期的那样，得到的结果显示，在 EGF 刺激下，ERK1/2 的磷酸化水平呈剂量反应性增加，而 ERK1/2 的表达水平保持不变。

简化的信号通路

MAPK/ERK 细胞信号传导

MAPK/ERK 信号级联可被多种参与细胞生长和分化的受体激活。核心信号转导级联可引发对众多细胞过程的调节，包括细胞粘附、迁移、凋亡、分化和代谢。MEK1/2 催化 ERK1/2 在酪氨酸 204 和苏氨酸 202 位点的磷酸化。作为响应，ERK 会磷酸化数百种细胞质和细胞核底物。MAPK 信号传导的高度复杂性和多样性使得 ERK 成为生物学中的关键调节因子和主要信号节点。

ERK 在 G 蛋白偶联受体（GPCR）信号传导中的作用

ERK 的调节在 GPCR 信号传导中起着重要作用，因此是一个重要的可测量的 GPCR 读数。GPCR 通过 G 蛋白发挥作用，调节广泛的细胞功能。在受到刺激时，这些受体激活诸如腺苷酸环化酶和磷脂酶 C 等效应器，这不仅会影响细胞内第二信使（如环磷酸腺苷（cAMP）和钙离子（Ca2+））的浓度，还会介导 ERK1/2 的磷酸化。研究还表明，GPCR 也可以以一种不依赖于 G 蛋白但依赖于 β- 抑制蛋白的方式介导 ERK1/2 的激活。