将 MOLT-4 细胞在含完全培养基的 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养。孵育 24 小时后，用 3 mL 补充的 1X 裂解缓冲液 #4 在室温下轻轻摇晃裂解细胞 30 分钟。
用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 16 µL 各稀释液转移至小体积白色微孔板中，然后加入 4 µL 磷酸化 HDAC4（Ser246）检测试剂。使用等量的裂解物进行 HTRF 与蛋白质印迹法的平行比较。
蛋白质印迹法与 HTRF 的平行比较表明，在这些实验条件下，HTRF 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 8 倍。
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HDAC4 根据其磷酸化状态在细胞核和细胞质之间动态穿梭。
响应应激信号时，包括蛋白激酶 C（PKC）、蛋白激酶 D（PKD）和钙 / 钙调蛋白依赖性激酶（CaMK）在内的激酶会直接磷酸化 HDAC4，触发其从细胞核向细胞质输出。磷酸化的 HDAC4 与 14-3-3 蛋白结合并滞留于细胞质中，细胞质形式的 HDAC4 可能具有蛋白去乙酰化酶活性。压迫刺激会增加 PP2A 的活性，导致 HDAC4 去磷酸化，随后 HDAC4 与 14-3-3 蛋白分离并重新定位到细胞核中，从而抑制转录因子。
Runx2 编码肽酶 M10 家族基质金属蛋白酶（MMPs）的一个成员。该家族蛋白参与正常生理过程（如胚胎发育、繁殖和组织重塑）以及疾病过程（如关节炎和转移）中的细胞外基质降解。
MEF2 是一类在肌肉细胞分化和凋亡中起重要作用的转录因子。
此外，HDAC4 通过与 STAT1 相互作用并对其去乙酰化，促进 STAT1 的磷酸化和激活。激活的 STAT1 随后转移到细胞核中诱导基因表达，进而引发炎症和凋亡，并抑制自噬。
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- 应用：细胞信号传导
- 品牌：HTRF
- 检测方式：HTRF
- 兼容的裂解缓冲液：2 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液
- 分子修饰：磷酸化
- 产品类别：试剂盒
- 样品体积：16 µL
- 运输条件：干冰运输
- 靶标类别：磷蛋白
- 靶标物种：人、小鼠
- 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
- 单位规格：10,000 个检测点
