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HTRF STAT3 P-Y705 KIT - 50K PTS

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概述

这种基于 HTRF 的细胞检测方法能够快速、定量地检测 Tyr705 位点磷酸化的 STAT3，以此作为 JAK/STAT 信号通路活性的读数。STAT3 在许多癌症中表达上调，使其成为抗癌研究中的有力工具。

工作原理

磷酸化 STAT3（Tyr705）检测原理
磷酸化 STAT3（Tyr705）检测用于测量在 Tyr705 位点磷酸化的 STAT3。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 STAT3（Tyr705）检测使用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白质，且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 STAT3（Tyr705）双板检测方案
双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解液转移至 384 孔低体积检测板，再加入磷酸化 STAT3（Tyr705）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

磷酸化 STAT3（Tyr705）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 STAT3（Tyr705）可在单个平板中完成，该平板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案支持微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

使用磷酸化 STAT3 检测对 HTRF 与蛋白质印迹法进行比较
HeLa 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。用 5nM 的 IFNα 刺激 15 分钟。去除细胞培养基，向细胞中加入 3ml 裂解缓冲液，孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。取等量的裂解液用于蛋白质印迹法（WB）和 HTRF 的平行比较。两种方法的灵敏度水平相当：750 个细胞。HTRF 比蛋白质印迹法更便捷。

白细胞介素 6（IL6）对 NIH 3T3 细胞的剂量反应
鼠源 NIH 3T3 细胞（100,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的 IL6 刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，使用 HTRF 磷酸化 STAT3（Tyr705）细胞检测试剂盒的双板检测方案测量磷酸化 STAT3。

JAK 抑制剂对 HeLa 细胞的抑制作用
HeLa 细胞（100,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下与不同浓度的拮抗剂孵育 1 小时。然后加入激动剂（IFNα），孵育 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，使用 HTRF 磷酸化 STAT3（Tyr705）细胞检测试剂盒的双板检测方案测量磷酸化 STAT3。

HTRF 总 STAT3 检测用于检查 STAT3 的磷酸化状态
HeLa 细胞（100,000 个细胞 / 孔）用 IFNα 激活 15 分钟，采用磷酸化 STAT3（Tyr705）和总 STAT3 检测的双板检测方案。结果显示，经 IFNα 刺激后，STAT3 的磷酸化呈剂量反应性增加，而 STAT3 的表达水平保持恒定。

简化通路

细胞因子受体信号中的 STAT3
在细胞因子和生长因子的作用下，STAT3 被受体相关激酶磷酸化，然后形成二聚体并转移到细胞核中，在那里作为转录激活因子发挥作用。STAT3 介导多种基因在细胞受刺激后的表达，因此在许多细胞过程（如细胞生长和凋亡）中起着关键作用。白细胞介素 6 家族细胞因子与 gp130 受体结合后，会触发 JAK2 对 STAT3 的磷酸化。STAT3 也是其他受体（如受体酪氨酸激酶（EGFR、cmet 等）和 c-src）的靶标。

规格参数

其他规格
应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样本体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：传染病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤学与炎症、罕见病
单位规格：50,000 次检测

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货号：62AT3PEY

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