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HTRF IR BETA P-Y1150KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化胰岛素受体 β（Tyr1150/1151）检测可对胰岛素受体 β 上 Tyr1150/1151 位点的磷酸化进行检测。在胰岛素和胰岛素样生长因子的刺激下，胰岛素受体参与多种通路，如胰岛素信号通路和 FoxO 信号通路。

工作原理

磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）检测原理

磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）检测用于测定 Ser177/181 位点磷酸化的胰岛素受体 β。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且在免洗涤的检测形式下为评估蛋白质的磷酸化状态提供了方法。

phospho-insulin-receptor-beta-ser177-181-assay-principle

磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

phospho-irbeta-ser177-181-2-plate-assay-protocol

磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化胰岛素受体 β（Ser177/181）可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中完成，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

phospho-irbeta-ser177-181-1-plate-protocol

检测验证

磷酸化胰岛素受体 β（Tyr1150/1151）在 HepG2 细胞上的验证

将 HepG2 细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下过夜孵育后，向细胞中加入系列稀释的胰岛素，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 5 分钟。移除刺激培养基，向细胞中加入 50µL 裂解缓冲液，轻轻摇晃 30 分钟完成裂解。将 16µL 样品转移至 384 孔小体积板中，然后加入 4µL 磷酸化胰岛素受体 β HTRF 检测试剂，过夜后记录信号。

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磷酸化胰岛素受体 β（Tyr1150/1151）在 HepaRG 细胞上的验证

将 HepaRG 细胞以 200,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 5 天后，在含有 30µM 过钒酸盐的情况下，向细胞中加入系列稀释的胰岛素，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 5 分钟。移除刺激培养基，向细胞中加入 50µL 裂解缓冲液，轻轻摇晃 30 分钟完成裂解。将 16µL 样品转移至 384 孔小体积板中，然后加入 4µL 磷酸化胰岛素受体 β HTRF 检测试剂。同时，将 16µL 样品分装到其他孔中，加入 4µL 总胰岛素受体 β HTRF 检测试剂，过夜后记录信号。

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磷酸化胰岛素受体 β（Tyr1150/1151）与蛋白质印迹法的比较

将人 Hek 293 细胞培养至 80% 汇合度。经胰岛素和过钒酸盐共同处理后，裂解细胞并通过离心收集可溶性上清液。对细胞裂解物进行系列稀释，取 16µL 各稀释液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，最后加入磷酸化胰岛素受体 β HTRF 细胞检测试剂盒试剂。平行对比显示，HTRF 磷酸化检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 8 倍。

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规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、神经科学
单位规格：50,000 个检测点

没有数据

货号：63ADK016PEY

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