HTRF VASP P-S157 KIT - 50K PTS

概述

磷酸化VASP（Ser157）细胞检测是监测PKA激活的理想方法，PKA可使VASP的157位丝氨酸磷酸化。VASP参与细胞运动、迁移和黏附过程，这使得磷酸化VASP检测成为心血管、肿瘤和炎症研究中的重要工具。工作原理

磷酸化VASP（Ser157）检测原理 磷酸化VASP（Ser157）检测用于测量157位丝氨酸磷酸化的VASP。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化VASP（Ser157）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生FRET信号。该信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。 磷酸化VASP（Ser157）双板检测方案 双板方案包括：先在96孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至384孔小体积检测板，再加入磷酸化VASP（Ser157）HTRF检测试剂。此方案可监测细胞的活力和汇合度。 磷酸化VASP（Ser157）单板检测方案 使用HTRF试剂检测磷酸化VASP（Ser157）可在同一板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的HTRF质量。 检测验证 福司柯林处理的A431细胞验证 将人A431细胞以100,000个细胞/孔的密度接种到96孔板中，在37°C、5% CO₂条件下孵育24小时。用不同浓度的福司柯林处理30分钟后，移除培养基，加入60µL裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡30分钟裂解细胞。将16µL裂解物转移至384孔小体积白色微孔板中，加入4µL HTRF磷酸化VASP（Ser157）、磷酸化VASP（S239）或总VASP检测试剂。过夜孵育后记录HTRF信号。 福司柯林处理的NIH3T3细胞验证 将小鼠NIH3T3细胞以100,000个细胞/孔的密度接种到96孔板中，在37°C、5% CO₂条件下孵育24小时。用不同浓度的福司柯林处理30分钟后，移除培养基，加入60µL裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡30分钟裂解细胞。将16µL裂解物转移至384孔小体积白色微孔板中，加入4µL HTRF磷酸化VASP（Ser157）、磷酸化VASP（S239）或总VASP检测试剂。过夜孵育后记录HTRF信号。 简化通路 VASP的功能与调控 血管扩张剂刺激磷蛋白（VASP）是一种肌动蛋白相关蛋白，属于Ena-VASP家族。VASP可刺激肌动蛋白丝延长，参与细胞骨架重塑和细胞极性调控。VASP蛋白涉及轴突导向、血小板活化和细胞迁移过程。在血小板中，VASP是环磷酸腺苷（cAMP）依赖性蛋白激酶A（PKA）和环磷酸鸟苷（cGMP）依赖性蛋白激酶G（PKG）的主要底物。PKA的优选作用位点是157位丝氨酸（Ser-157），而PKG的优选作用位点是239位丝氨酸（Ser-239）。磷酸化可调节F-肌动蛋白结合、肌动蛋白丝延长和血小板活化。在心血管疾病研究中，VASP的磷酸化常被用于监测降低血小板反应性的药物效果。规格参数

其他规格 - 应用领域：细胞信号传导 - 品牌：HTRF - 检测方式：HTRF - 分子修饰：磷酸化 - 产品类别：试剂盒 - 样品体积：16µL - 运输条件：干冰运输 - 目标类别：磷酸化蛋白质 - 目标物种：人、小鼠 - 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET） - 治疗领域：心血管疾病、代谢/糖尿病 - 单位规格：50,000个检测点