HTRF VASP TOTAL KIT - 50K PTS

概述

Total VASP 细胞检测试剂盒旨在监测磷酸化和非磷酸化 VASP 蛋白的表达水平。它与我们的磷酸化 VASP 试剂盒兼容，能够从单个样本中分析磷酸化蛋白和总蛋白，从而更好地反映 PKA 和 PKG 的激活情况。VASP 参与细胞运动、迁移和黏附过程，这使得磷酸化 VASP 检测成为心血管、肿瘤和炎症研究中的宝贵工具。工作原理

Total-VASP 检测原理 Total-VASP 检测可对细胞裂解物中 VASP 的表达水平进行定量。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板，无需凝胶、电泳或转膜步骤。Total-VASP 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 VASP 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET（荧光共振能量转移）信号。信号强度与样本中蛋白质的浓度直接成正比，并且在无需洗涤的检测形式下即可评估蛋白质的表达。 Total-VASP 双板检测方案 双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入 Total-VASP HTRF 检测试剂。该方案可监测细胞活力和汇合度。 Total-VASP 单板检测方案 使用 HTRF 试剂检测总 VASP 可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。检测验证

基于小鼠 NIH3T3 细胞的 Total VASP 检测：HTRF 检测与蛋白质印迹法的比较 将小鼠 NIH3T3 细胞以 8×10⁶ 个细胞的密度接种到 T175 cm² 培养瓶中，在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 48 小时。用 50μM 毛喉素处理 30 分钟后，加入 3mL 裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。将细胞裂解物用补充的裂解缓冲液进行系列稀释，取 16μL 各稀释液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，然后加入 4μL HTRF Total VASP 检测试剂。取等量裂解物进行蛋白质印迹法和 HTRF 检测的平行比较。结果显示，HTRF 检测仅需 2500 个细胞即可实现最小信号检测，而蛋白质印迹法需要 20,000 个细胞才能检测到信号。因此，磷酸化 VASP（Ser239）HTRF 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 4 倍。 经毛喉素处理的 A431 细胞验证 将人 A431 细胞以 100,000 个细胞/孔的密度接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 24 小时。用不同浓度的毛喉素处理 30 分钟后，移除培养基，加入 60μL 裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。取 16μL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4μL HTRF 磷酸化 VASP（Ser157）、磷酸化 VASP（Ser239）或总 VASP 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号 经毛喉素处理的 NIH3T3 细胞验证 将小鼠 NIH3T3 细胞以 100,000 个细胞/孔的密度接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 24 小时。用不同浓度的毛喉素处理 30 分钟后，移除培养基，加入 60μL 裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。取 16μL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4μL HTRF 磷酸化 VASP（Ser157）、磷酸化 VASP（Ser239）或总 VASP 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。 简化通路 VASP 的功能与调控 血管扩张剂刺激磷蛋白（VASP）是一种肌动蛋白相关蛋白，属于 Ena-VASP 家族。VASP 可促进肌动蛋白丝延长，并参与细胞骨架重塑和细胞极性维持。VASP 蛋白涉及轴突导向、血小板活化和细胞迁移等过程。在血小板中，VASP 是环磷酸腺苷（cAMP）依赖性蛋白激酶 A（PKA）和环磷酸鸟苷（cGMP）依赖性蛋白激酶 G（PKG）的主要底物。其中，PKA 的优选磷酸化位点是 Ser-157，而 PKG 的优选磷酸化位点是 Ser-239。磷酸化修饰可调节 F-肌动蛋白结合、肌动蛋白丝延长和血小板活化。VASP 磷酸化常被用于监测降低心血管疾病中血小板反应性的药物效果。规格参数

其他规格 应用领域：细胞信号传导 品牌：HTRF 检测方式：HTRF 分子修饰：总蛋白（Total） 产品类别：试剂盒 样本体积：16 µL 运输条件：干冰运输 靶标类别：磷蛋白 靶标物种：人、小鼠 技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET） 治疗领域：心血管疾病、代谢/糖尿病 单位规格：50,000 次检测点数