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HTRF AKT3 P-S473 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化 AKT3（Ser473）检测试剂盒旨在对丝氨酸 473（Ser473）位点磷酸化的 AKT3 的表达变化进行可靠定量。AKT 也被称为蛋白激酶 B（PKB），是一种癌基因，在调控细胞凋亡、细胞增殖、转录、细胞迁移和葡萄糖代谢中发挥关键作用。其中，AKT3 在神经科学研究中具有重要意义。

工作原理

磷酸化 AKT3（Ser473）检测原理

磷酸化 AKT3（Ser473）检测可测量在 Ser473 位点发生磷酸化的 AKT3。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测采用全板式操作，无需凝胶、电泳或转膜步骤。此检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。第一种抗体特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则不依赖蛋白质的磷酸化状态进行识别。当蛋白质发生磷酸化时，两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的格式即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 AKT3（Ser473）双板检测方案

双板检测方案的流程为：在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再加入磷酸化 AKT3（Ser473）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 AKT3（Ser473）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 AKT3（Ser473）可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案在实现微型化的同时，仍能保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

磷酸化 AKT3 检测：封闭肽的抑制作用

用人类胰岛素样生长因子 - 1（IGF-1）刺激 SH-SY5Y 细胞 15 分钟。刺激后，移除培养基，使用 1X 裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 14µL 裂解物转移至 384 孔白色平底微量板中，加入 2µL 不同浓度的 AKT3 特异性封闭肽，随后加入 4µL HTRF 磷酸化 AKT3（Ser473）检测试剂。室温孵育过夜后，记录 HTRF 信号。

简化通路

AKT 简化通路

AKT（或蛋白激酶 B）在调控细胞存活和凋亡中起关键作用。这种丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶受胰岛素以及多种生长和存活因子调控，通过涉及 PI3 激酶的渥曼青霉素敏感通路发挥作用。当 AKT 的 plekstrin 同源（PH）结构域与磷酸肌醇结合时，AKT 可被两种不同的激酶磷酸化：PDK1 在苏氨酸 308（Thr308）位点磷酸化，雷帕霉素复合物 2（mTORC2，即哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物 2）在丝氨酸 473（Ser473）位点磷酸化，从而激活 AKT。

规格参数

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样本体积：16µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人类
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：神经科学
单位规格：50,000 个检测点

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货号：63ADK082PEY

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